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灵芝子实体粗多糖提取及仪器分析

zhouleizi

2014/12/31

食品安全/营养与健康

灵芝子实体粗多糖提取及分析

灵芝多糖具提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤、安神、降血糖、消除放化疗副反应、除胃热、保肝解毒等功效。灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，因此，也特别受到医药科技工作者的重视，研究报道也最多。现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。

材料

实验所用材料购于市场,经鉴定为灵芝。

前处理

取灵芝子实体500g剪碎,用75%的乙醇回流脱酯2小时,反复三次,离心,上清液用旋转蒸发仪蒸除乙醇,得灵芝浸膏。

提取

灵芝残渣分别用pH=2的盐酸溶液、6%的尿素溶液、3%的三氯醋酸溶

液室温提取24小时,透析,离心,上清液加入4倍85%乙醇醇析,得粗多糖FS。

分级

灵芝子实体经脱脂,分别用上述三种方法提取得粗多糖FS,对其中的FS水溶粗多糖进行乙醇分级。FS配成5%多糖溶液,搅拌滴加乙醇,使乙醇的浓度依次达到30%、50%、70%离心所得沉淀依次为FS-A、FS-B、FS-C。

脱蛋白

5%糖溶液,用链蛋白酶,按酶:蛋白=l:50取蛋白酶,加入糖

溶液中,加少量二甲苯防腐,1%NaCI作激活剂,37度,保温24小时,按多糖液总体积1/4加入Sevgae试剂(氯仿:正丁醇=4：1),充分振荡1-2小时,静止,离心,取上清重复,至无游离蛋白为止。

脱色

取lg多糖加水溶解,配成0.5%的糖溶液,滴加氨水使溶液pH=8。向多糖溶液中加H₂O，原液搅拌至溶液呈淡黄色为止,对流水透析24小时,蒸馏水透析24小时,浓缩、醇析、常规干燥得脱色多糖。

常规千燥法

醇析后的样品依次用95%乙醇、无水乙醇脱水,再用乙醚脱去乙醇后,置于盛有P2O5及NaOH的真空干燥器内真空干燥。

甲醇解

彻底干燥的糖样10mg,加入无水HCL甲醇2ml,充N₂封管,80度甲醇解20小时,凉至室温后,用无水KOH甲醇中和至pH=6,然后40度减压旋转蒸干,常规干燥。

硅烷化

向彻底干燥的甲醇解产物中加入0.2ml无水吡啶(内含饱和甘露醇作内标),75度溶解30分钟,然后加入0.3ml硅烷化试剂(六甲基二硅胺烷：三甲基氯硅烷=2：1),摇匀,静止几分钟,即可取上清进行分析。

完全酸水解

20mg糖样加入1M H₂SO₄2ml,封管,100度水解8小时,然后用BaCO:中和,过滤,滤液留作分析。

纸层析

滤纸：新华1号(7×40cm)

溶剂系统：正丁醇-乙酸-水为：4：l：5(上层)

显色剂：苯胺-邻苯二甲酸正丁醇饱和水溶液

展层时间约为30小时,喷雾,100度,15分钟显色。

总糖含量测定(酚硫酸法)

将10mg/100ml多糖溶液,6%的酚溶液,浓H₂SO₄;依次按1:0.5:2.5的比例加入,振荡,静止,冷却,然后在490nm波长下比色,所得数值查标准曲线可得总糖含量。

红外光谱法.(I.R)

SPECORDRI型红光谱仪,样品与KBr压片,常规方法测定。

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逆天一棍

第1楼2014/12/31

红外图看不到。
另外，没有对照品的气相色谱图谱吗？
最终的结果和结论是怎么样的呢？

0

zhouleizi

第2楼2014/12/31

红外扫描的不太好，见谅，另外这个多糖没有对照品。
逆天一棍(fengmo4668) 发表:红外图看不到。
另外，没有对照品的气相色谱图谱吗？
最终的结果和结论是怎么样的呢？

0

逆天一棍

第3楼2014/12/31

没有对照如何做定位及测定含量呢？
zhouleizi(zhouleizi) 发表:红外扫描的不太好，见谅，另外这个多糖没有对照品。

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