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单抗加入烷化剂碘乙酰胺后产生沉淀怎么办

毛细管电泳（CE）

  • 如题，我做的一个单抗A用碘乙酰胺封闭二硫键，混合后产生了沉淀；用其他的单抗B样品就没事。而且其他的单抗样品B溶于单抗A的溶剂后再加碘乙酰胺也是澄清的。求问这是什么原因，有没有别的烷化剂或者别的合适的方法来封闭二硫键呢
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  • 该帖子已被版主-nini2006加5积分，加2经验;加分理由:发帖
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  • nini2006

    第1楼2015/02/06

    也许是你的样品里面含有能够跟碘乙酰胺反应并产生沉淀的物质。你要确定这沉淀物质是不是蛋白质，如果不是就好办，低速离心（建议5000g左右）除掉就可以了。

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  • lingyou

    第2楼2015/02/10

    你的意思是样品生产过程中引入的某些杂质产生了反应？那如何能够确定是不是蛋白呢？我已经排除了溶剂的干扰，除了溶剂样品里还会有非单抗的物质存在吗

    nini2006(nini2006) 发表:也许是你的样品里面含有能够跟碘乙酰胺反应并产生沉淀的物质。你要确定这沉淀物质是不是蛋白质，如果不是就好办，低速离心（建议5000g左右）除掉就可以了。

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  • threetigers107

    第3楼2015/03/02

    沉淀前测个蛋白浓度，沉淀后离心再测个蛋白浓度，比较看看是否有明显变化

    lingyou(v2983592) 发表:你的意思是样品生产过程中引入的某些杂质产生了反应？那如何能够确定是不是蛋白呢？我已经排除了溶剂的干扰，除了溶剂样品里还会有非单抗的物质存在吗

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  • lingyou

    第4楼2015/03/02

    ok,回头试试

    threetigers107(threetigers107) 发表:沉淀前测个蛋白浓度，沉淀后离心再测个蛋白浓度，比较看看是否有明显变化

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  • yayicuo

    第5楼2018/03/03

    应助达人

    这个方法好，测两次蛋白含量，虽然原理很简单，但确实是很好的一个方法。

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