仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

【求助】用荧光染料衍生核酸,染料会吸附到裸管内壁吗?

  • katherine7
    2011/01/18
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 对核酸Marker进行柱前衍生,然后进行分离。但是始终没有峰出现,且RFU一直在0-0.5之间抛物线变化。不知道这到底是怎么回事,是不是样品根本没运行到检测窗口,或者标记染料被脱去了?对废液进行琼脂糖凝胶电泳检测,并未发现含我的样品。
    如果说荧光染液是吸附到内壁上了,且一直未洗脱掉,那到底要怎样才能彻底清洗干净毛细管柱?
  • 该帖子已被版主-sunpengwjh加2积分,加2经验;加分理由:积极提问!
    +关注 私聊
  • sunpengwjh

    第1楼2011/01/18

    进样后用压力推一下试试,看看能出峰么?

0
    +关注 私聊
  • katherine7

    第2楼2011/01/18

    用压力推一下?怎么个推法呀?

    sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:进样后用压力推一下试试,看看能出峰么?

0
    +关注 私聊
  • sunpengwjh

    第3楼2011/01/18

    电泳不是可以冲洗柱子么?进样后直接用冲柱子的方法,看看能不能将样品推出来,正常应该可以的!

    katherine7(katherine7) 发表:用压力推一下?怎么个推法呀?

0
    +关注 私聊
  • poplar_yang

    第4楼2011/01/20

    you can do it separately:
    对核酸Marker进行衍生以后, 直接进行琼脂糖凝胶电泳检测,是否发现样品?

0
    +关注 私聊
  • katherine7

    第5楼2011/01/20

    直接琼脂糖凝胶电泳检测,发现样品,且亮度明显。

    poplar_yang(poplar_yang) 发表:you can do it separately:
    对核酸Marker进行衍生以后, 直接进行琼脂糖凝胶电泳检测,是否发现样品?

0
    +关注 私聊
  • poplar_yang

    第6楼2011/01/22

    "对废液进行琼脂糖凝胶电泳检测,并未发现含我的样品。"

    对废液进行琼脂糖凝胶电泳检测,do you 发现衍生用的荧光染dye?
    if yes, your sample is degrade
    if not, your 是样品根本没运行到检测窗口.

0
    +关注 私聊
  • poplar_yang

    第7楼2011/01/22

    柱前衍生的核酸稳定多长时间, 我们发现最长约两天后,然后降低
    稳定多长时间依靠pH, buffer, ionic force, temperature.

    if the CE column condition is different, pH can make this degrade going fast in 40min.


0
    +关注 私聊
  • heguang

    第8楼2011/01/28

    核酸与SYBR类染料的结合是动态的,如果你不在毛细管里加入一定的染料,那么核酸在跑毛细管电泳的时候可能会和染料解离,导致你检测不到核酸。
    你可以将低浓度的SYBR染料加入buffer中,防止核酸与其解离。低浓度的染料不会产生荧光背景。

0
    +关注 私聊
  • katherine7

    第9楼2011/01/31

    The answer is not. 后来延长了分离时间,也没有改善分离结果。还是没有样品峰

    poplar_yang(poplar_yang) 发表:"对废液进行琼脂糖凝胶电泳检测,并未发现含我的样品。"

    对废液进行琼脂糖凝胶电泳检测,do you 发现衍生用的荧光染dye?
    if yes, your sample is degrade
    if not, your 是样品根本没运行到检测窗口.

0
    +关注 私聊
  • katherine7

    第10楼2011/01/31

    延长了分离时间,仍然没有东西。极可能是在跑毛细管电泳时核酸与染料解离了,且染料被毛细管柱吸附了,毕竟高浓度的染料应该也有荧光吸收才对。

0
查看更多
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...