关于HPLC柱前衍生化的计算

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应助达人

简单描述一下实验方法，或者计算方法，有没有参考标准之类的

中国药典一部 阿胶

对照品溶液的制备 取L-羟脯氨酸对照品、甘氨酸对照品、丙氨酸对照品、L-脯氨酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml分别含L-羟脯氨酸 80μg、甘氨酸0.16mg、丙氨酸70μg 、L-脯氨酸0.12mg的混合溶液，即得。
　　供试品溶液的制备 取本品0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液20ml，超声处理(功率500W，频率40kHz)30分钟，放冷，加 0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀。精密量取上述溶液2ml，置5ml安瓿中，加入等体积的盐酸，150℃水解1小时，放冷，移入蒸发皿中，用 10ml水分次洗涤，洗液并入蒸发皿，蒸干，残渣加0.1mol/L盐酸溶液溶解，转移至25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
　　衍生化 取上述对照品溶液和供试品溶液各5ml，分别置25ml量瓶中，加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯(PITC)乙腈溶液2.5ml，1mol/L三乙胺乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加50%乙腈至刻度，摇匀。取溶液10ml，加入10ml正已烷，振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，即得。
　　测定法 分别精密吸取衍生化后的对照品溶液与供试品溶液各5μl，测定，即得。
　　本品按干燥品计，含L-羟脯氨酸不得少于8.0%，甘氨酸不得少于18.0%，丙氨酸不得少于7.0%，L-脯氨酸不得少于10.0%。

衍生化的过程要代入计算公式嘛 如果代入算的话 含量远远不合格 不算的话勉强和厂家报告差不多 第一次做氨基酸类的 请教了 谢谢

应助达人

衍生化过程如果带入计算，则样品含量在计算的时候需要与标样同步，即取5mL稀释至25mL。个人认为可以不带入计算更为简便，直接根据标准曲线计算出衍生之前样品中待测组分的含量，即1mL中含有待测组分的质量，然后根据前处理的稀释倍数进行计算

应助达人

由于样品和标准溶液时同步衍生的，通过峰面积和标准品的含量可以计算出衍生之前1mL供试品中待测物质的含量C，然后依据您的前处理方法进行如下计算:
(C*25*25)/(2*0.25)

计算是跟之前的一样的，样品衍生，标准品也是衍生的，所以稀释倍数可以忽略了，当然了要在样品与标准品相同的样品量和衍生试剂量

谢谢 我也是这么想的。第一次做衍生的HPLC