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液相色谱分析中如何才能提高分离度？

happytiankong1

2015/05/05

今天有客户咨询，他在做产品有关物质时，它的色谱峰分离度有时好，有时不好。流动相的比例我也做了适当调整。到底还有什么因素会导致它分离度不好呢？
关于这个问题，我们首先要看影响分离度的因素有哪些？各个因素起到的作用分别是？哪一个因素是主导的？根据这些我们在来想办法，改善分离度。
下面俺就为大家分析分析一下哈～～，供参考～～
下式为分离度计算公式

N：柱效(Efficiency)

反映色谱柱性能，柱效越高，分离度越好。在其他条件恒定的情况下，塔板数增加一倍，分离度仅提高40%。操作中，可通过下面两种方式增加塔板数进而提高分离度：其一，使用长柱或双柱串联，但也会使分离时间大大延长；其二，使用细粒径填料的色谱柱，但这需要耐更高压力的液相色谱系统。相比之下后者更为可取。
α：选择性(selectivity)
是指色谱柱-流动相体系分离两个化合物的能力。选择性主要与固定相、流动相组成以及柱温等因素有关，与保留值也密切相关，其中固定相和流动相组成影响较大。以最常见的反相模式为例，反相柱(包括C18、C8、PH等)是以分配作用对化合物进行保留的，不同化合物的分离是基于它们在键合相与流动相中分配系数的差异，如果两种化合物的水溶性、在烷烃-水体系的分配系数等方面存在明显差异，那么这些化合物通常是能够利用反相柱达到分离；PH柱对具有苯环的化合物具有特殊保留。正相模式下，硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互作用，对化合物的基团具有选择性，常常用于结构类似物、异构体化合物的分离。流动相方面，降低流动相的洗脱强度通常可以增大分离度；而有机溶剂类型也会影响分离，比如反相条件下，乙腈和甲醇的选择性就存在很大差异，这种差异需要在实践中摸索，但无论如何，多种溶剂类型带给我们更多的实现分离的可能。
k：容量因子
随着容量因子k的增大，分离度也随之增加，这种影响在k值较低时非常明显，当k值大于10时，k值增加对分离度的影响就不再显著，这就告诫无原则地提高k值以增大分离度是没有意义的。增加键合相密度能够提高k值；另外改变键合基团类型也能改变k值，比如在反相色谱中，随着键合相碳链长度的增加，k值逐渐增大。

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happytiankong1

第1楼2015/05/05

分离度，指相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值.也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程度.

R越大,表明相邻两组分分离越好.一般说当R＜1时,两峰有部分重叠；当R=1.0时,分离度可达98%；当R=1.5时,分离度可达99.7%.通常用R=1.5作为相邻两组分已完全分离的标志.当R＝1时,称为4σ分离,两峰基本分离,裸露峰面积为95.4%,内侧峰基重叠约2%.R＝1.5时,称为6σ分离,裸露峰面积为99.7%.R≥1.5称为完全分离.

《中国药典》规定R应大于1.5.

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吕梁山

第2楼2015/05/05

好像不同的公式，得到的值不一样

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happytiankong1

第3楼2015/05/07

恩，还有一个保留时间的公式，不过，得到的值不一样，我还真不知道～～
吕梁山(shih20j07) 发表:好像不同的公式，得到的值不一样

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