试剂 0.2 mol/ L磷酸盐缓冲液 Na2HPO4·2H2O 35.61 g 或Na2HPO4·7H2O 53.65 g / Na2HPO4·12H2O 71.64 g NaH2PO2·H2O 27.60 g 或NaH2PO4·2H2O 31.21 g 加双蒸水(ddH2O)到1000 mL 0.1 mol/ L磷酸盐缓冲液(PBS) 0.2 mol/ L磷酸盐缓冲液 250 mL 加双蒸水到500 mL 2 % 低温琼脂 低温琼脂 1.0 g 加双蒸水到 50 mL 加热到沸腾,溶液均匀后备用 1 % 戊二醛固定液 25 %(m/v)戊二醛水溶液 2 mL 0.2 mol/ L磷酸盐缓冲液 25 mL 加双蒸水到50 mL 1 % 锇酸固定液 2 %(m/v)锇酸水溶液 10 mL 0.2 mol/ L磷酸盐缓冲液 10 mL 包埋剂A液 Epon 812 树脂 50 mL 十二烷基琥珀酸酐(modecenyl succinic anhydride, DDSA) 80 mL 包埋剂B液 Epon 812 树脂 50 mL 六甲酸酐(methyl nadic anhydride, MNA) 44.5 mL 2,4,6 - 三甲氨基甲基苯酚(2, 4, 6 - tridimethylamino methyl phenol, DMP-30) 甲苯胺蓝染液 甲苯胺蓝 1 g 1 mol/ L NaOH 10 mL 加双蒸水到50 mL 混匀过滤后使用 1 % 醋酸双氧铀染液 醋酸双氧铀 0.2 g 加双蒸水到10 mL 封口膜封口,4℃避光保存 1 % 柠檬酸铅染液 硝酸铅 0.265 g 柠檬酸钠(含2分子结晶水) 0.352 g 加双蒸水到10 mL① ① 配制铅染液时,要先加水6 mL,超声震荡30 min,使乳白色柠檬酸铅悬液充分混匀。然后滴加1 mol/L NaOH,并不是晃动,直至溶液变清亮。最后定容至10 mL。 ② 细胞样品处理和藻类及其他游离样品处理流程可相互参照,即细胞样品可以酌情使用琼脂铸模法取材固定,藻类及其他游离样品也可以使用血清预包埋法取材固定,总体视样品密度及其对于温度的耐受等条件而定。 封口膜封口,4℃保存
仪器 修块机 Leica EM TRIM 切片机 Leica EM UC6 光学显微镜 Nikon 80i 及配套拍照系统DS-L1 透射电子显微镜 JEOL-1230 Gatan Bioscan Camera 792