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谈谈蛋白质基质干扰问题

  • 老多_小多
    2015/07/17
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 都知道毛细管电泳可以分析多肽和蛋白质,
    但是,如果我要测其他的组分,比如维生素或者有机酸,蛋白质是不是会干扰呢?
    一起来说说检测经历
    谈谈蛋白质基质干扰问题,会存在吗?

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  • nini2006

    第1楼2015/07/17

    非常好的问题!

    首先明确一下概念。你说的基质效应,英文名是matrix effect,最常出现在质谱检测上。指的是样品中存在的目标检测物之外的复杂物质对检测灵敏度和分离度等所产生的干扰作用。这些干扰物质较为常见的是样品中大量盐的存在所产生的干扰。

    英文名很明确,但中文名我有点搞不清。因为除了“基质效应”的叫法,也有见到说“基体效应”的。虽然英文名还是一样,但似乎中文当中,说“基体效应”的更多是用在CE和HPLC等色谱分离上,而基质效应则更多用于质谱检测上。具体这两者有没区别,我还真说不准。

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  • nini2006

    第2楼2015/07/17

    因为中文名不明确,所以我用英文名好了。matrix effect普遍存在于中药、蛋白质、生物样品等样品当中。对分离和灵敏度有很大的影响。这就是为什么我们明明用标准物质优化出来的方法,到了实际样品那就出现各种问题的原因。

    克服的方法,可以提纯,但是提纯过程中很容易造成损失。如果是盐的影响就除盐,除盐方法很多,这个影响相对比较容易消除。如果不想太麻烦给样品提纯或者除盐,为了准确检测,可以采用标准加入法,但样品量大的时候采用这个方法是会累死一头老黄牛的。另外最常用也是最有效的,就是内标法。这个方法总体比较简单,但内标物要找准,必要的时候一个样品当中需要添加两个以上内标物。

    但是,话说回来,如果matrix effect严重拉低了峰高或严重降低了分离度,导致峰面积已经不落在线性范围内了,那最后还是要乖乖提纯的。

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  • nini2006

    第3楼2015/07/17

    matrix effect里可是有大学问的,不过我先说那么多,抛砖引玉,看看大家都怎么说。嘿嘿~

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  • cpudaxiao

    第4楼2015/07/18

    这个主要是检测器的种类有关系,比如紫外的话,蛋白吸收波长与其它物质还是有明显区别的,荧光另外讲。前处理用高有机相沉淀蛋白之后基本问题不大啦

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  • 老多_小多

    第5楼2015/07/20

    在中文里面,基质效应和基质干扰好像有点区别

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  • CEcret

    第6楼2015/07/23

    蛋白基质可以通过多种方法去除的,例如沉淀法,超滤法等等。应该不是很难

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  • 老多_小多

    第7楼2015/07/27

    沉淀法我倒是经常用

    CEcret(v2812644) 发表:蛋白基质可以通过多种方法去除的,例如沉淀法,超滤法等等。应该不是很难

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