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流动相的选择和储存秘诀

happytiankong1

2015/07/24

在色谱分析中，流动相必不可少，那么问题来了，如何选择流动相？
当然，要看所要检测样品的性质了，高效液相根据色谱柱的不同分为反相和正相，常用的C18柱、C8柱为反相柱，一般反相是首选，流动相的极性大于色谱柱的极性，流动相由极性较大的水和极性较小的有机溶剂（常用的是乙腈、甲醇）按照一定的比例配制而成。
当样品为强亲水性样品时，流动相中含水时，在色谱柱上保留很弱，需采用非水反相色谱。当样品为强疏水性样品时，流动相中含水时，在色谱柱上保留很强，需采用正相色谱。正相色谱时，流动相比例极性小于色谱柱的极性，流动相由非极性的正己烷和极性较大的有机溶剂（二氯甲烷、丙醇、异丙醇、甲基叔丁基醚等等）按照一定的比例配制而成。
流动相选择秘诀：

秘诀1

由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。

秘诀2

三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

秘诀3

粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈，
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度;
乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈，甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度;乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。但是有时候样品峰形不好或者分离不好，更换溶剂试试是一个很好的选择，毕竟不同的溶剂提供不同的选择性。

来源：互联网

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shudawang

第1楼2015/07/24

甲醇和乙腈这部分讲的很详细啊

0

wsy18

第2楼2015/07/25

很好的资料，是必须掌握的。

0

happytiankong1

第3楼2015/07/27

是的，挺实用的
shudawang(v2893540) 发表:甲醇和乙腈这部分讲的很详细啊

0

吕梁山

第4楼2015/07/28

非常全面的资料

0

生活就这么美好

第5楼2015/07/28

这个问题属于基本的了，呵呵

0

生活就这么美好

第6楼2015/07/28

各有利弊吧，呵呵

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