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琼脂糖方法交流

娇娇2

2015/08/06

琼脂糖凝胶电泳是分子实验的基础，方法步骤也再熟悉不过了，把它下来主要是和大家一起分享自己的操作习惯和通过图片展示一下操作环境，并一起讨论实验中遇到的问题。
一简单概述

琼脂糖凝胶电泳时用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法，因为琼脂糖凝胶具有网络状的结构，小分子可以顺利通过，而大分子在通过时会受到阻力，从而把大分子和小分子分离来。在电泳时，分子移动速度与分子大小和分子所带电荷有关，分子越大移动速度也慢。蛋白质是高分子物质，因此不适用于凝胶电泳，现今凝胶电泳被广泛应用于类似核酸的小分子的研究中。
二实验操作总结
1准备好各种试剂和设备，设备包括电泳槽，电泳仪，微波炉，三角瓶，搅拌器，制胶槽和梳子，电子秤，量筒；试剂包括电泳缓冲液TAE，琼脂糖，核酸染料。
2 根据制胶的大小和浓度，称量相应重量琼脂糖，加入对应体积的缓冲液，混匀，用微波炉加热至琼脂糖完全溶解，此时溶液澄清，无游离状物质漂浮于液体中。

3 加热溶解后冷却，期间加入核酸染料，一点即可。
4冷却至不烫手即可导入到制胶槽中。冷却的目的是防止琼脂糖溶液温度过高是制胶槽和梳子变形。倒入制胶槽后，赶走胶上的气泡，插上梳子。

5等待十分钟左右至胶凝固，拔掉梳子。注意的是经常有人拔梳子时吧点样孔破坏，所以拔梳子时手掌先压住电泳槽，然后拿住梳子两边，快速向上用力将梳子拔出，这样能较好的避免点样孔的损失。
6胶制好后，点样。点样分为干点和湿点两种，干点是不在缓冲液中点，直接在外界中操作；湿点是将胶放入缓冲液中点样，样品点样前先加入Ladding Buffer，Ladding Buffer目的是帮助样品沉淀，有时干点可不加，但是湿点的时候最好要加。
7电泳，将点样后的胶放入电泳槽中，注意电极方向，根据电泳槽大小设置电泳时间和电压。

8成像。电泳完后，在琼脂糖凝胶显色系统中拍照保存，进行后续实验。

9 分析。从上面的图片可以看出有些带相对较亮，有些带相对较弱，可能与DNA浓度有关。另外有些带似乎有拖带，可能是引物二聚体。不过总体还说结果还算可以，带型清晰可变。

三写在后面的话
总的来说步骤有些多，但是并不是很复杂，也没有很难的技术要点，但是根据成相系统拍摄出来的照片效果显色，一个同样的样品，有时因为制胶的原因，呈现的效果完全不一样，这可能与胶的溶解和加入染料的量、电泳条件等等有关，因此琼脂糖凝胶电泳时需不断总结经验，做出来的胶图才能很漂亮。

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小鱼625

第1楼2015/08/07

琼脂糖是什么？主要应用在什么方面？

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