ProElut AFT-3一步净化检测粮谷中黄曲霉毒素解决方案

微雨燕双飞

2015/08/27

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ProElut AFT-3一步净化检测粮谷中黄曲霉毒素解决方案

目前检测黄曲霉毒素主要有薄层色谱法(TLC)、免疫亲和柱-高效液相色谱法 (HPLC-FL)、酶联免疫法(ELISA)、免疫亲和柱-高效液相色谱法串联质谱法等，薄层色谱法和酶联免疫法主要应用黄曲霉毒素的定性，不能准确定量，免疫亲和柱-液相色谱法和液相色谱法-串联质谱能够准确定量，但是由于免疫亲和柱与质谱检测成本高，应用范围受到限制。
迪马科技开发的粮谷中黄曲霉毒素的测定采用检测成本较低的固相萃取-液相色谱法，对比国标方法《GB/T18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》，本方案具有以下优势：
方法优势
1. 前处理步骤简单，样品经有机溶剂提取后，直接上样固相萃取柱，收集流出液后进行色谱分析，方法具有回收率高、稳定性好、净化效果优异等特点；
2. 避免了免疫亲和柱容易受环境影响而引起黄曲霉毒素回收率低和净化效果不好的弊端，保证了实验结果的重现性和准确性；
3. 过柱方法简单易操作，无需固相萃取柱活化、淋洗、洗脱步骤，上样后直接收集流出液进行色谱分析，一步即可完成净化，对操作人员要求不高，检测成本相对较低，能被很多企事业单位采用；
4. 可同时检测黄曲霉毒素M1、G1、B1、G2、B2，并能够达到准确定性定量，检出限是0.05μg/kg，远低于国家标准《GB 2761-2011 食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》。
ProElutAFT-3专用柱优势
1. ProElutAFT-3柱由两种吸附剂按照一定的比例分层填装而成，采用不同作用机理去除杂质，同时对黄曲霉毒素没有不可逆吸附，保证了样品的净化效果及回收率；
2. 本产品是商品化的成品柱，吸附剂稳定性好，不受外界环境因素影响，保证实验结果的重现性和准确性；
3. 过柱过程操作步骤简单，节省时间，提高工作效率。
以下为详细解决方案，敬请参考！
1、适用范围
本方案适用于玉米面和花生中黄曲霉毒素M1、G1、B1、G2、B2的检测，方法检出限是0.05 μg /kg。
2、样品准备
称取2.0 g样品，加入8 mL 85%乙腈水，振荡2 min，超声10 min，6000 rpm离心2 min，收集上清液，待净化。
3、SPE柱净化——ProElutAFT-3 12 mL（Cat.#：65915）
将待净化液加入柱中，收集2mL流出液，在50 ℃水浴下减压蒸干。
4、衍生
依次加入0.5mL正己烷和0.5 mL三氟乙酸，旋好玻璃塞充分混匀衍生液，45℃静置10min，吹干衍生液，用10%乙腈水定容至1 mL。
5、分析条件

色谱柱：	Diamonsil C18(2)，250 × 4.6 mm，5 μm（Cat.#：99603）
流速：	1.0 mL/min
检测器：*	荧光检测器，Ex：365 nm；Em：435 nm
柱温：	30℃
进样量：	20 μL
流动相：	A：水 B：异丙醇+乙腈=3+2

梯度

时间（min）	0	5	15	20	21	30
A（%）	90	80	80	60	90	90
B（%）	10	20	20	40	10	10

6、添加回收结果
6.1 玉米面中黄曲霉毒素添加回收结果

NO.	化合物名称	添加水平（μg/kg）	回收率（%）
1	M1	1.2	89.33
1	M1	0.6	93.06
2	G1	1.2	93.94
2	G1	0.6	123.44
3	B1	1.2	93.96
3	B1	0.6	99.05
4	G2	1.2	100.01
4	G2	0.6	106.07
5	B2	1.2	102.19
5	B2	0.6	93.1