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微聊ABC，经典小荟萃——0301

一片枫叶

2016/03/30

液相色谱（LC）

1：液相紫外检测器，为什么要一路测量，一路参比，可以不要参比吗——色谱工程师
微A：液相紫外检测器，为什么要一路测量，一路参比，可以不要参比吗
微B：不可以，扣除背景影响。
微C：参比波长一般设置在比检测波长大50—100nm处无紫外吸收的区域，参比波长的设置是为了消除仪器以及环境对检测的影响，对于双光路系统是必要的，可以设置参比波长，对于单光路系统也没有必要设置，若设置参比波长太小，会出现负峰。
微A：双束光检测紫外，是什么意思？是几个光源？
微C：双光路检测器包括检测光路和参比光路两部分，是利用两个接收元件分别接收来自样品池和参比光路的光束，以两者的光强差为输出信号反映被测样品的浓度。
单光路检测器直接测量流动相通过检测池时，以其中所含样品对紫外光的吸收引起接收元件输出信号的变化来获得样品浓度。
双光路检测系统的最大优点是补偿了由于电源电压变动引起的光源强度改变，因而提高了检测器的稳定性，降低了噪声和漂移。
微A：一个氘灯，还是两个氘灯，还是分光器分成了两束光呢？
微C：1：只有一个光源的单光源双光路，2：有两个光源的双光源双光路。
微A：哦，那个参比池是空气还是流动相，参比波长怎么设呢？
微C：参比光路的主要部分按具体情况可以是充满流动相的参比池，连续流过流动相的参比池，也可以是不设参比池、只以空气作参比。参比波长一般设置在比检测波长大50—100nm处无紫外吸收的区域。
微A：如何理解可变波长，光栅不动那波长因为什么而改变呢，光栅转动波长就会变化的，那波长是不断的变化的吧，看了一下原理，可变波长，是光删不停的旋转啊！

微C：可变波长检测器在某一时刻仅可得到某一波长下的吸光度值，将各个时刻所得到的吸光度值描点作图，即可得到所需的色谱图。
所谓的可变波长是指在不同时刻可以得到不同波长下的吸光度值，进而得到对应的光谱图。
微A：我想问问，液相色谱，紫外检测器可变波长都是波长不停的变化啊，在检测中？
微C：当进行光谱扫描的时候，光栅应该是由步进电机带动光栅转动的。

微A：什么情况下可以不设参比池或者空气做参比？
微C：系统默认设置就可以了吧！在紫外区内参比波长的默认设置好像是氘灯的特征吸收波长的设置。
2：安捷伦管线的认识——陌生人
微A：安捷伦1260毛细管的管径如何辨别？

微B：下图毛细管规格一目了然

3：空白系统峰如何去掉——安捷伦液相-涛
微A：空白系统峰如何去掉——最高的峰

微B：右上角有删除按钮，
4：请问一下液相平衡柱子基线波动这么大是什么原因——基础分析-吴银霞
微A：仪器配置：二元高压泵，流动相：30%的甲醇水，进样：甲醇，工作站两根线：上面是基线，下面是压力线。

微A：请问一下液相平衡柱子基线波动这么大是什么原因？平衡柱子发现基线不对，走样品发现保留时间漂移很多，每针出峰时间都不一致。

结论：因为有漏液有盐析出了，把有盐析出的地方拆下来洗了，还有就是柱箱连接柱子那边的管路也擦了一遍，我是B泵的，A泵没有拆，清洗后恢复正常。

5：左泵头上出液口管道螺丝断在里边怎么处理——基础分析-吴银霞

微A：问题是现在这个螺丝另一半断在里面了
微B：螺丝断了，除了换没有别的办法，找工程师啊，别自己再动手了，省的把柱塞杆再弄坏了。
结论：找工程师更换左泵腔。
6：相邻两针出双峰——丽娜
上一针走样是这样的，

然后下一针就变成这样的。

微A：流动相是乙酸钠75甲醇25，乙酸钠浓度是0.05mol/L，检测成分：维生素b1
微B：根据她的图谱，峰面积应该没有发生太大的变化，只是出现了两个峰。可以推测成分发生了分解或PH对其造成了影响，如果确实是PH值的问题，可以通过实验去验证的，在酸性和碱性以及中性的图谱观察是有什么不同。维生素B1在碱性状态下也不稳定，0.05mol/L的醋酸钠pH=8.7。
结论：流动相需调ph至4.0。
7：如何理解反相色谱柱填料的疏水性？
微B：大体上可以理解为：每颗硅胶上键合了多个C18烷基链，跟章鱼一样，试想如果在纯水环境中，它的爪子没法展开，而是缩成一团，这样就会坍塌，爪子就没法抓住目标物，也就没法实现保留了。有的T3柱键合了两种爪子，也就可以在纯水环境中了伸开来。
微C：色谱柱的疏水性问题，主要出现在含碳量高的柱子上，因为碳链太多，导致硅胶表面就像个涂满油的桌面，一滴水滴在上面，就直接滑过去了，没有保留。所以一般用纯水做流动相要加个5%左右的有机溶剂改变下极性。
封尾的原因是因为硅胶上即使键合了C18，还是会有很多的OH导致产生很多氢键，这些氢键会产生极性的保留效果，导致分离的效果变化，所以用化学手段把这些氢键修饰点，只产生非极性的保留，这就是封尾。
8：疏水柱保留原理
微A：对于反相疏水柱，增加水相也就增加了流动相的极性，降低了流动相的疏水性，保留增加。对于亲水柱，增加有机相也就降低了流动相的亲水性，保留增加。这句话是否正确，请给予指点！
微B：哦，是不是这样理解？反相柱，增加水，那么溶剂在柱子上的分配比会减少，然后溶质的分配比增加，所以溶质的保留时间增加。对于亲水柱，增加有机相，使溶剂在柱子上的分配比也减少了，然后保留时间增加。说白了就是相似相容，加分配比。
9：缓冲盐会不会堵柱子
微A：周末走样，柱子在柱箱那里漏了，走了一个周末，流动相带盐，会不会把柱子堵了哇，流动相都蒸发差不多啦，也没报警，我用40度柱温。
微B：会不会冲下柱子就知道啊，拿10%乙腈水冲
微C：不会堵，但是不要纯溶剂冲。

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