HPLC分析中常见问题②——不出峰篇

不出峰篇

在做液相分析时，可能有很多因素导致不出峰的现象，大抵可以通过以下方面进行问题排查：
一、检测条件
取下色谱柱，接入两通后进样：
①仍不出峰：说明仪器装置和检测方法等方面出现了问题：

检测器类型——根据分析物质的结构性质等因素选择合适的检测器，以保证待测物质的响应和灵敏度

使用UV时——考察紫外吸收波长设定是否合适

使用MS时——排除电离抑制效应的影响

考虑进样量、样品浓度等是否合适

如上图，在离子交换模式下使用氨基柱对维生素C进行分析，平衡30min后进样，没有色谱峰溶出；继续平衡1小时后再次进样，基线出现较大波动；平衡3小时后，维生素C出峰，继续进样，色谱峰保留时间趋于稳定。这说明使用氨基柱在离子交换模式下进行分析时，需对色谱柱进行充分平衡。
如果实验时间比较紧张，可以在不超过色谱柱压力使用范围的前提下将平衡流速提高，或者在流动相pH值不变的前提下提高流动相盐浓度进行平衡。