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【求助】10%中性甲醛固定标本和4%多聚甲醛固定区别

  • huiguinian
    2006/11/09
  • 私聊

分析化学

  • 10%中性甲醛固定标本和4%多聚甲醛固定的区别是什么,二者的都可以长期固定吗
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  • 醋老西

    第1楼2006/11/09

    转贴自联合病理网,介绍的比较详细。

    病理组织学常用制备技术

    组织的固定

    (一) 固定的概念

    应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定(fixation)。
    病理标本(样本)离体后,由于微环境的变化将发生自溶和(或)腐败,使其结构破坏。固定的目的和机制是:①使蛋白质凝固,终止或减少分解酶的作用,防止自溶,保存组织、细胞的离体前结构状态,包括保存组织或细胞的抗原性,使抗原不失活,不发生弥散。②保存组织、细胞内的蛋白质、脂肪、糖原、某些维生素及病理性蓄积物,维持病变的特异性特征。③使上述物质转为不溶解状态,防止和尽量减少制片过程中人为的溶解和丢失。④起助染作用。
    固定方法有:①物理学方法,如低温冷冻,干冰(dry ice,即固态无水碳酸)冰冻真空脱水,石蜡渗入法。②化学方法,采用各种化学溶液作固定液,使组织细胞进入固定状态。这是国内最常用的方法。

    固定应在标本离体后尽快进行,小标本可在取材后直接放入固定液内,大标本应在手术结束前或结束后迅速放入固定液内。

    固定液与标本的比例不得少于标本体积得5倍。有特殊要求者应事先选定相应得固定液,如欲查糖原,应选择无水乙醇作固定液等。

    固定得时间应适当,微小标本(如胃粘膜等)2~4h即可,大标本应置放12~24h,但亦不要过久,以免影响抗原性,造成免疫组化操作中得困难。

    (二) 常用固定液及其配制

    固定液分单纯固定液和混合固定液。

    1甲醛(formaldehyde)

    是无色气体,易溶于水成为甲醛溶液。易挥发,且有强烈刺激气味,常用得是37%~40%得甲醛溶液,商品名为福尔马林(formalin)。用作固定的浓度习惯为10%福尔马林(即1份甲醛溶液加9份水配制而成),实际含甲醛4%。
    10%福尔马林渗透力强,固定均匀,对组织收缩少。对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好,是最常用的固定剂。

    经福尔马林固定时间长的组织,易产生黑色的沉淀,称福尔马林色素。

    2 乙醇

    无色液体,易溶于水,它除可作为固定剂外,还可作为脱水剂,对组织有硬化作用。固定用一般是80%~95%浓度,乙醇渗透力校弱,它能溶解脂肪,核蛋白被沉淀后,仍能溶于水,因此核的着色不良。

    3 中性甲醛液(混合固定液)

    甲醛(浓)120ml,加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠(NaH2PO4•H2O)4g,磷酸氢二纳(Na2HPO4)13g。此液固定效果比单纯10%福尔马林要好。

    4 AF液(混合固定液)

    95%乙醇90ml,甲醛(浓)10ml。也有配方是95%乙醇85ml,甲醛(浓)10ml,冰醋酸5ml。

    此液除有固定作用外,兼有脱水作用,因此,固定后可直接入95%乙醇脱水。
    以上4种固定液中,以中性甲醛为首选,其次为10%福尔马林,乙醇应尽量不用。

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  • livingston2

    第2楼2007/01/16

    长知识了,谢谢!

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  • Ins_23919c7a

    第5楼2024/01/06

    我认为很有可能两者本质无太大差别
    以下是网上搜到的关于多聚甲醛固定液配置方法和解聚方法
    碱解法是另一种多聚甲醛解聚方法,它利用碱性条件将多聚甲醛分解成低分子量单体或寡聚体。具体来说,碱解法通常采用以下条件:
    1. 碱性条件:通常使用氢氧化钠、氢氧化钾或胺类碱作为催化剂,在室温下进行反应。
    2. 时间:反应时间取决于所需产物的种类和质量。通常,反应时间在几小时到数十小时之间。
    3. 水含量:由于多聚甲醛对水敏感,因此在进行碱解反应时需要控制水含量。一般来说,水含量不超过10%。

    要配制1 L的4%多聚甲醛,在通风柜中,将800 mL的1X PBS加入玻璃烧杯,边搅拌边加热至约60℃,注意不能让溶液沸腾。

    往热PBS溶液中加入40g多聚甲醛粉末。

    多聚甲醛粉末可能不会立即溶解,可通过滴入1N NaOH搅拌逐步提高pH值,直至多聚甲醛粉末完全溶解。

    待溶液冷却,过滤溶液,用PBS调节溶液体积至1L。

    检查pH值,用稀盐酸调节pH值至6.9左右。

    可以发现这两者有很多相似之处 。 可能多聚甲醛固定液与甲醛固定液无太大差别,主要成分相同。(以上仅为个人观点和网络资料)

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