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如何正确地配制缓冲盐流动相?

happytiankong1

2016/06/12

有3种方法可用于配制具有精确pH的缓冲盐流动相，
例如需要配置1 L的20 mM醋酸铵缓冲液，pH为4.0，可按照下述3种方式配制。

（1）精确地称取一定量的醋酸铵以及醋酸，定容与1000 mL纯化水中。
（2）分别配置20 mM的醋酸铵溶液以及20 mM的醋酸溶液，以醋酸溶液调节醋酸铵溶液pH到4.0。
（3）配制20 mM的醋酸铵溶液，使用冰醋酸调节pH到4.0，该种方法由于使用了醋酸调节pH，醋酸铵缓冲盐的浓度要略微大于20 mM。在反相HPLC中，分析方法对缓冲盐浓度的轻微变化并不是那么敏感。但是，对于离子交换色谱，亲水相互作用色谱以及Mixed-Mode色谱来说，由于分析方法对离子浓度比较敏感，该种配制方法需要尽可能避免。
此外，如果缓冲盐溶液的pH需要调整到缓冲pH范围以下时，此时需要避免该种配置方式，因为此时需要添加的醋酸量已经会使得缓冲盐的浓度发生很大改变，足以影响分析方法的重现性。

在配置缓冲盐流动相时，一般只对水相部分调节pH而不对有机相调节pH。此外，需要避免预先将水相与有机相混合之后再调节pH。此时pH计测出的结果并不能够反应真实情况，pH计所测定的结果也受到温度的严重影响。但有时，不可避免地需要使用该配置方法，如在使用Mixed-Mode色谱柱分析多元酸的时候，需要预先对流动相混合之后调节pH，此时需要注意在调节pH的时候，对pH计所处的环境温度进行严格控制。

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