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Ecosil钙型糖柱做甘露醇和山梨醇分不开原来是因为这个？

caodahua0751

2016/07/14

化学药检测

在选用Ecosil Sugar Ca2+色谱柱分析甘露醇和山梨醇有关物质小记分享
按照药典要求用磺化的聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物填料进行有关物质分析
实验室前人用的是Bio-Rad的Aminex HPX-87H 7.8*300mm 8μm（2012年买的但是标签花了），由于好久没人用它来做过实验了，测试后发现柱压高、峰型坍塌，用二次蒸馏水50℃，0.5ml/min冲洗再生仍然无效。
故向上头申购对应的柱子，由销售商推荐了两款进口规格相当的Ecosil sugar Ca2+和Shodex SC1011 8.0*300mm 6μm，一问发现这类柱子还蛮贵的（近万），选择了价格便宜得多些的Ecosil sugar Ca2+；谁知道买回来马上问题不断啊，但也因为该事而对该类型色谱柱有了新的认识。
故障：情况有些曲折，首先是拿到柱后进行活化平衡后，开始进一定浓度标样，结果峰型不是很好，理论塔板不足800，出峰时间有些晚，两目标峰（20和22min出峰）分离不开，同时谱图上还有稳定的脉冲峰出现，重复进样几次，问题依然存在。

针对脉冲峰初步怀疑是流动相脱气不足的问题，因为毕竟是新购置的示差光检测器，同时也没有在线脱气机，故将二次蒸馏水进行超声+真空脱气；换上新的流动相，置换完系统后，尖脉冲峰的问题解决了，但是甘露醇和山梨醇两个峰还是没分开，分离度完全达不到2以上。
致电销售商询问解决方法，提到是否色谱柱在刚启用前，未能冲洗干净系统或是水中引入其他类型的金属离子，与Ecosil sugar Ca2+填料里面的钙离子产生了交换效应，导致色谱柱性能下降，同时还询问温度是否正常，建议用0.1M硝酸钙溶液，85℃，低流速冲洗30-60倍柱体积看是否有改善；
按照如上方法进行冲洗和平衡后再次进行测试，没想到做出来的谱图一塌糊涂，柱压力还算正常，但又有气泡的痕迹（小倒峰，看来还是得买脱气机才行），峰型明显坍塌分叉了。

打开柱头发现里面已经发生了严重的填料坍塌！

将谱图发至销售商，一并排查后发现是自己操作中未注意到流速与温度的次序的问题（低温时候流速升的过快造成的）。
他们的技术人员提到：
1）分析开始时，低流速持续送液，待色谱柱升至高温时，才可逐步提高流速。色谱柱低温时快速升高流速至0.6ml/min，会导致压力骤升，冲击填料。
2）分析结束时，降低流速至0.2ml/min，关闭柱温箱。低流速持续送液，待色谱柱充分冷却至室温时，停泵。否则如果色谱柱高温时，直接停泵，也会导致填料坍塌。
这是我首次使用聚合物填料的色谱柱，聚合物填料的色谱柱还果真是没有硅胶基质的机械强度高耐不了高压；还好该销售商不错，见我如此诚实，虽才用几下就给倒霉的我弄坏了，但是比起其他人遇到问题就直指就是色谱柱人员的要可爱多，所以很感激能给我申请换了一支新的，问题完美解决。嗯，看来做分析实验还是要本着胆大心细的态度，尊重科学和事实，才能有所收获。

分
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明堂

第1楼2016/07/14

这个聚合物填料居然会塌陷的这么恐怖，真没有预料到！

0

d475643196

第2楼2016/07/15

良心啊！居然可以给换新的。不过我们还是要在实验前了解清楚操作步骤和注意事项，不然损失的可能不止色谱柱，还有宝贵的时间呐！学习了学习了！对于聚合物基质和硅胶基质还是不太了解他们的区别，请教一下楼主啊。

0

甘小贤

第3楼2016/07/15

谢谢楼主分享。新柱子在使用之前还是要好好看看操作说明书呀，遇到好的供应商还能处理，要是不负责任的你就自己扛吧，呵呵。

0

又又1990

第4楼2016/07/15

很棒的文章呀

0

446537495

第5楼2016/07/15

看上去是不错，不过要用实验验证一下。

0

guoyuliang

第6楼2016/07/15

受教了不错的文章以后可以多发一些哦

1

我是风儿

第7楼2016/07/16

应助达人

对啊，就这么简单就能说是流速高造成色谱柱塌陷了？

0

caodahua0751

第8楼2016/07/17

低温升的。
我是风儿(nphfm2009) 发表:对啊，就这么简单就能说是流速高造成色谱柱塌陷了？

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caodahua0751

第9楼2016/07/17

又又1990(v2984502) 发表:很棒的文章呀

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土老冒豆豆

第10楼2016/08/03

应助达人

幸亏楼主不用赔偿这几千块的新柱子啊。

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