C18柱是反相色谱柱中应用最为广泛,对大多数化合物都适用的色谱柱。但对于C18柱难以保留和分离的分析对象,有时需要选择C18以外的色谱柱。为了改变保留分离机理,有时会选择键合五氟苯基的PFP色谱柱和键合金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME色谱柱。 在此,我们使用市场上销售的PFP色谱柱和资生堂的CAPCELL PAK ADME色谱柱,对副肾皮质荷尔蒙氢化可的松及其前体可的松的保留溶出行为进行了研究。 通过对流动相组成进行调整,两款色谱柱均对该两成分取得了分离。与PFP柱相比,使用CAPCELL PAK ADME S5时,即使提高流动相中的有机相比例,也能实现可的松与氢化可的松的分离,且分析时间更短。 另一方面,在色谱柱的使用过程中,随所选色谱柱官能团的不同,背景噪声也会有不同程度的增加,进而对分析结果产生影响。在此,为了调查不同官能团的影响,我们对色谱柱的劣化进行模拟,并对背景噪声进行确认。具体试验方法如下:在超过色谱柱pH使用范围的强酸性流动相条件下(pH 1),不注入样品进行分析。 如图3所示,从各色谱柱第三次分析测得的色谱图扣除不接色谱柱的色谱图后,得到了各柱的背景噪声图谱。 图3 除去流动相影响的色谱图 如图3,随有机相比例的提高,PFP柱的背景噪声大幅上升,而CAPCELL PAK ADME S5没有检出背景噪声的上升。这主要是因为PFP官能团具有UV吸收,在苛刻条件下官能团脱落时导致背景噪声的提高,而没有UV吸收的金刚烷基团不会出现背景噪声的增加。