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关于色谱柱的死体积计算及其用途

  • 瓶子装什么
    2016/12/21
  • 私聊

凝胶色谱(GPC)

  • 我最近在用GPC测量某天然高分子的分子量,遇到一些问题,由于刚开始接触液相色谱,很多知识还不太懂,特来此版块请教。
    我所用的流动相是四氢呋喃,用的两根柱子如下所示,做标样用的是1000~50000的聚苯乙烯标准物,现有若干疑问如下:
    Part NumberID (mm)Length (mm)Pore SizeParticle Size(μm)PhaseMW Range
    PL1110-63007.5300/3MIXED-Eup to 25000
    PL1110-65307.53001000Å5/500~60000
    1.是否串联的色谱柱的分子量范围就选取大的那一个范围?小范围的柱子只是起到更好地分离效果?
    2.我们导师让我用分子量为100KDa的聚苯乙烯标准物在这个系统上计算出voild volume,这个是空隙体积吗?也就是死体积?用流速乘以该标样的流出时间就能得到么?
    3.一般在计算出死体积可以用于什么参数的计算呢?可以计算出流体动力学半径么?
    4.另外本人刚刚接触液相色谱这一块,很多基础知识还不懂,除了泡论坛,还有没有一些国内外的教材推荐学习呢?
    不胜感激!
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  • 夏天的雪

    第1楼2016/12/22

    应助达人

    帮您转到合适的版面吧

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  • 瓶子装什么

    第2楼2016/12/23

    谢谢版主^^ 我刚来论坛 没仔细看版块分布 发完了之后才发现有凝胶色谱这个版块><

    夏天的雪(bingwang228) 发表:帮您转到合适的版面吧

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  • 小不董

    第3楼2016/12/28

    应助达人

    1.是否串联的色谱柱的分子量范围就选取大的那一个范围?小范围的柱子只是起到更好地分离效果?
    测定的样品的分子量范围最好在柱子的测量范围内,测定的才能准确。
    两根柱子串联,要做标准样品来确定校正曲线。
    2.我们导师让我用分子量为100KDa的聚苯乙烯标准物在这个系统上计算出voild volume,这个是空隙体积吗?也就是死体积?用流速乘以该标样的流出时间就能得到么?
    洗脱体积,来计算其样品的分子量的。
    3.一般在计算出死体积可以用于什么参数的计算呢?可以计算出流体动力学半径么?
    4.另外本人刚刚接触液相色谱这一块,很多基础知识还不懂,除了泡论坛,还有没有一些国内外的教材推荐学习呢?
    论坛里也有些资料,你可以搜索下。可以下载。也有整理的帖子。

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  • 瓶子装什么

    第4楼2016/12/28

    小不董(doxw0323) 发表:1.是否串联的色谱柱的分子量范围就选取大的那一个范围?小范围的柱子只是起到更好地分离效果?
    测定的样品的分子量范围最好在柱子的测量范围内,测定的才能准确。
    两根柱子串联,要做标准样品来确定校正曲线。
    2.我们导师让我用分子量为100KDa的聚苯乙烯标准物在这个系统上计算出voild volume,这个是空隙体积吗?也就是死体积?用流速乘以该标样的流出时间就能得到么?
    洗脱体积,来计算其样品的分子量的。
    3.一般在计算出死体积可以用于什么参数的计算呢?可以计算出流体动力学半径么?
    4.另外本人刚刚接触液相色谱这一块,很多基础知识还不懂,除了泡论坛,还有没有一些国内外的教材推荐学习呢?
    论坛里也有些资料,你可以搜索下。可以下载。也有整理的帖子。
    谢谢版主的回复,关于串联的两根柱子,分子量测量范围是小于6万,那我用10万的标准物去过柱子的时候,是不是就可以认为它基本无保留的全部通过柱子,那它的洗脱体积就等于它的空隙体积?

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  • 小不董

    第5楼2016/12/28

    应助达人

    超过测量范围,也就不准确了,也不能说一点保留都没有,柱子填料还没能做的那么精细。
    但你要做准确的话,还是要找到合适柱子。

    瓶子装什么(v2699117) 发表:

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  • tigertooth

    第6楼2017/04/11

    死体积就是在柱子上没保留的样品的出峰时间,也就是理论上,根据你的柱子条件,分子量超过60000D的样品都在这个地方出峰,这个体积可以用流速X时间来得到。
    如果要得到流体力学半径,一般需要动态光散射或粘度检测器。

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