[求助]关于用凝胶色谱法测量分子量

max26495

2006/07/11

私聊

凝胶色谱（GPC）

我公司目前有两个新产品需要进行分子量的测定，两种物质分别是明胶和羟乙基淀粉溶液，在实验过程中

发现如下的问题，请教各位前辈。

1.关于仪器：
我们目前采用的是Agilent1200折光检测器，用的就是Agilent公司的GPC软件。根据其用户手册，Agilent的GPC软件在进行宽标准校正的时候需要有一系列的窄标样品先进行窄标准校正，目前我们没有准备这些窄标样品，所以感觉无从下手。并且根据某药检所复核我们提供的质量标准意见，其中就提到了不同公司的GPC软件不同，所以他们在实验的时候是用到了窄标样品的。
而据我们了解，Waters的GPC软件只要明确知道宽标样品的Mn和Mw值就可以进行宽标校正了，不知是不是两款软件设计理念的不同，亦或是Agilent系列软件还有其它我们没有掌握的功能。如果用Agilent的普适校正，需要的A、K两个常数又如何得到，方法的准确度又如何。

2.关于标准品
根据目前得到的、国家批准了的技术标准，采用的标样是葡聚糖670标准品，进行宽标准校正，得到的校正方程用于测量一个已知分子量的羟乙基淀粉，如果偏差范围在6%以内，可以进行样品的测量。但用的葡聚糖670标样与羟乙基淀粉根本不是一类物质，这样的校正是否可信？
我们用不同分子量的羟乙基淀粉工作对照品（由总部提供，他们用了多角度激光检测器进行的测定）做过实验，只在分子量180000左右的羟乙基淀粉用这样的宽标校正方法得到的分子量比较准确，而分子量60000多的羟乙基淀粉用这种宽标校正法测出的分子量居然达到了90000多。对于明胶也是如此，工作对照品测量值与真实值都有不小的差距。于是我们现在采取了一个变通的办法，以测量值和理论值分别为X、Y，两组工作对照品（不同分子量的明胶，羟乙基淀粉各两个）分别做一次线性方程，再对测量得到的分子量做一个校正。以羟乙基淀粉为例，130000分子量附近样品测量值与校正值相差了10000多，老板可管不
了这么多，他认为180000的羟乙基淀粉可以这么做，130000的样品自然也可以这么做，这样对于我们的质量控制就很不利。还有就是我们有一个设想，直接用我们的工作对照品做宽标准校正，这样似乎更加合理，不知各位前辈有何高见。
当然2中涉及到的问题我们都是用的Waters系列的GPC软件，只要求有宽标标准品，知道Mn和Mw值就可以了，我们现在实验室的设备还是Agilent系列，所以还请用Agilent的朋友多多指教。

谢谢各位关注，请大家不吝赐教！

补充：谢谢大家的关注，现在又有了最新的要求，130000分子量的样品应该用葡聚糖410做标样，现在问题就集中在Agilent与Waters两家不同的GPC软件上了，购买窄标的话成本高是一个方面，供货周期也长，现在我们那个急啊！