食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法解决方案

微雨燕双飞

2017/02/24

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三氯蔗糖又名三氯半乳蔗糖，俗称蔗糖素，由英国泰莱公司(Tate&Lyie)与伦敦大学共同研制并于1976年申请专利的一种新型甜味剂。由于其具有甜度高(甜度为蔗糖的600倍)、甜味纯正等特点，被认为是目前最优秀的功能性甜味剂之一，代表了目前强力甜味剂研究的最高水平。虽然科学家们经过长期的毒理实验证明其具有较高的安全性，但也有三氯蔗糖可诱发偏头疼发作的报道。
建立食品中三氯蔗糖的测定方法，可为食品生产企业提供生产性指导，并为质量监督部门提供食品质量监管依据。我国国家标准《GB 22255-2014 食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》中制定了三氯蔗糖的HPLC-ELSD检测方法。
方法优势：
迪马科技在参考国家标准《GB 22255-2014 食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》基础上，进行了方法优化，推出《食品中三氯蔗糖的测定》方法，该方法：

采用固相萃取-高效液相色谱法测定食品中的三氯蔗糖，使用ProElut PLS 固相萃取柱净化样品，通过HPLC-ELSD检测；
前处理步骤简单、净化效果好、重现性好，定量限7.5 mg/kg，符合《GB 22255-2014 食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》对三氯蔗糖的限量规定；
适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等。

以下为详细解决方案，敬请参考！

食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法

1、适用范围
本方案适用于液态奶、酸奶、酱油、醋、饼干、奶酪、奶茶、可乐和果冻中三氯蔗糖的检测，方法定量限7.5 mg/kg。
2、标准品配制
标准储备溶液：准确称取标准品，用水配制成10 mg/mL的储备液，吸取一定体积10 mg/mL储备液用水配成浓度为1000 μg/mL的储备液。
3、提取
3.1 含蛋白脂肪类液体：液态奶、酸奶、酱油和醋
10 mL样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化；
3.2 含蛋白脂肪类固体：饼干、奶酪和奶茶
5 g样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化；
3.3 饮料：可乐（量取前超声排气泡）
10 mL样品，加入10 mL 水，混匀，取10 mL，待净化；
3.4 果冻
5 g样品，加入5 mL 水，热水超声溶解，混匀，趁热净化。
注：《GB 22255-2014 食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》中提取液为75%甲醇水溶液，减压浓缩过程中暴沸严重，不易操作。
4、净化——ProElut 200 mg/6 mL PLS（Cat.#：68012）

(1)活化：	依次向柱中加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；
(2)上样：	将待净化液加入柱中，弃去流出液（控制流速不超过每秒1滴）；
(3)淋洗： (4)洗脱：	向柱中加入5 mL 20%甲醇水溶液，弃去流出液；向柱中加入3 mL甲醇，收集流出液；
(5)定容：	将洗脱液在50 ℃下减压蒸干，用流动相定容至1 mL，供HPLC分析。

5、色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 × 4.6 mm，5 μm（Cat.#：99601）
流速：1.0 mL/min
进样量：20 μL
柱温：35 ℃
检测器：SEDEX LT-ELSD，温度：40℃，压力：3.5 bar，Gain：6
流动相：A：水；B：乙腈
梯度设置

时间/Min.	0	14	15	22	23	30
A（%）	89	89	10	10	89	89
B（%）	11	11	90	90	11	11

6、添加回收结果
食品中三氯蔗糖的HPLC检测的添加回收结果

	添加水平200 mg/kg		添加水平20 mg/kg		添加水平7.5 mg/kg		空白含量(μg/mL)
	回收率(%)	加标量	回收率(%)	加标量	回收率(%)	加标量	空白含量(μg/mL)
早餐奶	99.01	10 mg/mL 200 μL	109.82	1000 μg/mL 200 μL	96.52	1000 μg/mL 75 μL	—
巧克力奶	99.70	10 mg/mL 200 μL	100.91	1000 μg/mL 200 μL	95.88	1000 μg/mL 75 μL	—
咖啡奶	100.34	10 mg/mL 200 μL	112.34	1000 μg/mL 200 μL	126.00	1000 μg/mL 75 μL	—
养乐多	128.83	10 mg/mL 200 μL	—	—	—	—	130.8
酸奶	—	—	105.58	1000 μg/mL 200 μL	123.42	1000 μg/mL 75 μL	—
酱油	77.85	10 mg/mL 200 μL	—	—	—	—	113.48
醋	108.22	10 mg/mL 200 μL	143.64	1000 μg/mL 200 μL	205.47	1000 μg/mL 75 μL	—
饼干	—	—	102.64	1000 μg/mL 100 μL	103.28	1000 μg/mL 37.5 μL	—
奶酪	—	—	88.04	1000 μg/mL 100 μL	82.78	1000 μg/mL 37.5 μL	—
奶茶	—	—	101.48	1000 μg/mL 100 μL	169.05	1000 μg/mL 37.5 μL	—
可乐	—	—	103.97	1000 μg/mL 200 μL	98.49	1000 μg/mL 75 μL	—
果冻	—	—	93.89	1000 μg/mL 100 μL	96.27	1000 μg/mL 37.5 μL	—

食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法相关产品信息：

货号	名称	规格
样品前处理
68012	ProElut PLS	200 mg/6 mL, 30/pk
244358	12管防交叉污染真空SPE萃取装置	12位
4803	1,3,6mL柱管通用连接器	15/pk
4806	考克(控制流量)	15/pk
99011	真空/正压两用泵，无油	1/pk
99013	抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞)	1/pk
30039	FitMax针头式过滤器 Nylon	13 mm,0.22 μm 100/pk
30040	FitMax针头式过滤器 Nylon	13 mm,0.45 μm 100/pk
标准品
53-69293-100G	三氯蔗糖	100 g
色谱柱及保护柱
99601	Diamonsil C18(2)	150 × 4.6 mm，5 μm
HPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂
50101	乙腈 HPLC级	4 L
50102	甲醇 HPLC级	4 L
通用色谱产品
52401B	瓶架/蓝色（现货）	50孔
52401A	瓶架/白色（现货）	50孔
1034	样品瓶（棕色/螺纹）	2 mL, 100/pk
1035	样品瓶盖/含垫（已经组装）	100/pk
H80465	HPLC 进样针	25 μL