一次意想不到流动相配置错误带来的灾难及最后的解决方案

上篇文章谈到Tris分析过程中出现的一个问题，由于首次使用新柱，造成基线偏高，最后平衡了半天才把仪器弄稳定。

这次，在基本完成Tris的项目后，第二天，进行数据补充的实验，我想仪器已经稳定做了一整夜，流动相用完了，重新配置一瓶，只要再做几个小时就够了。

于是，我跟学生说，淋洗液40mmolMSA已经用完，重新配置一瓶，学生配流动相不止一次，应该没问题。

重新配置流动相后，重新平衡，按照经验不出半小时就够了，但我发现，基线本地偏高，不应该呀，15分钟后基线又变高，十分不解！这样，不管结果如何，先进样看看，是否出峰，主峰的保留时间与前面是否一致，奇怪的事，只出了一个很小的峰，位置也不对，再进一次，这次居然没峰了，倒峰还是有的！难道自动进样器有问题，检查后，应该正常。样品不对，检查后与昨天试同一瓶！问题在那里，再进一次，第三次的进样的倒峰明显偏后，样品无峰，有倒峰说明样品是打进去的，样品正确，怎么会没峰。

我百思不得其解，按照前后实验的细节进行排除，唯一的区别是流动相重新配置了，难道流动相会配错，浓度不对，试剂配错，已经配了好几次了，还能犯这个错误。我再次问学生关于流动相的事，居然给我一个想不到了答复，我配了NaOH了，明明是MSA，不止一次了，今天怎么会阴差阳错配成NaOH，我马上停泵，用PH试纸检查流动相，果然是NaOH，怎么会发生这样的错误，根本意想不到的错误！！！

我今天的实验必须完成，怎么办，流动相配反了，马上启动紧急程序：

1 将NAOH流路，马上换成水，断开泵与色谱柱的连接，先将泵系统中的NaOH快速清洗掉。

2 重新配置MSA流动相，等流路pH基本接近中性，换成MSA，再等流路pH呈酸性，接上色谱柱，目的使色谱柱重新平衡。

3 需要注意的事，由于NaOH进入了CS16色谱柱，虽然不多，但改变了色谱柱体系的pH，柱压将大幅度上升，清洗的流速大约只能开到0.5ml左右，如果开到1ml/min，柱压可能会超过色谱柱的最大耐受压力，而使色谱柱受损。

4 注意柱压的变化，最大压力不超过2000psi，随着MSA的进入，色谱柱系统pH重新回到酸性，NaOH被洗出，柱压将缓慢下降。

5 经过1-2小时，柱压基本正常，（中间可重新启动补液系统，逐步提高压力），启动安培模式，再大约1小时，仪器基线稳定，可以重新开始进样了。

如果不是我今天在现场，这种罕见的问题，学生根本不会发现。不过，对于dionex色谱柱，CS16进错流动相问题并不大，但是如果有些特殊色谱柱不承受这种巨大的变化，则会造成灾难性后果，戴安的阳柱耐受的pH在0-14，有些厂家的阳柱是硅胶型的，这样配置错误将直接报废色谱柱。