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保健食品中粗多糖的测定

高秋荣

2017/09/08

食品安全/营养与健康

保健食品中粗多糖的测定
西安国联质量检测技术股份有限公司
食品事业部：胡志雄

一、目的：对《保健食品功效成分检测方法》中粗多糖的测定方法（分光光度法）进行方法适用性验证。
二、验证内容：方法适用性验证包括线性范围、重复性、回收率。
三、验证方法：
1 范围
本标准适用于灵芝破壁孢子粉中粗多糖的含量测定。
2 规范性文件
《保健食品功效成分检测方法》
3 原理
多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚-硫酸作用成橙红色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量。
4 试剂和材料
4.1 试剂
实验室用水为双蒸馏水，所用试剂为分析纯级。
4.1.1 无水乙醇（C₂H₅OH)：分析纯。（来源：天津奥普升化工有限公司批号：20161/19)
4.1.2 葡萄糖(C₆H₁₂O₆)：分析纯（来源：上海金穗生物科技有限公司批号：AS：9001-22-3 )
4.1.3 苯酚（C₆H₆O）（来源：天津市天力化学试剂有限公司批号：20150408 ）
4.1.4 浓硫酸（H₂SO₄）（比重1.84）（来源：上海沃凯生物技术有限公司批号：20170301 ）
以上试剂符合检测要求
4.2 试剂配制
4.2.1 乙醇溶液（80%）：取20.0mL水与80.0mL无水乙醇混匀。
4.2.2 苯酚溶液（5%）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
4.2.3 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.5000g，加水溶解并定容至50mL。
4.2.4 葡萄糖标准使用液：吸取葡萄糖标准溶液1.0mL于100mL容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度。

5 仪器和设备
离心机：4000r/min、电子天平（万分之一）、分光光度计、水浴锅、漩涡混合器等。
以上仪器符合检测要求

6 试样处理
样品提取：称取混合均匀的固体样品1.0-2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水中加热1h，冷却至室温后补水至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。
沉淀粗多糖：准确吸取上滤液5.0mL置于50mL离心管中，加入无水乙醇(4.1.1）20mL，混匀，于4℃冰箱静置4小时，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%乙醇（4.2.1）溶液5mL洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用水溶解并定容至25mL。
7 测定：
准确吸取以上试液2.0mL于25mL比色管中，加入5%苯酚溶液（4.2.2）1.0mL，在漩涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸（4.1.4）10mL，在漩涡混合器上小心混匀，置于沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗多糖含量。
8. 公式
试样粗多糖含量按下式进行计算。
式中：
X—样品中粗多糖的含量，mg/100g； m₁—样品测定液中葡萄糖的质量，mg；
m₂—样品质量，g； V₁—样品提取液总体积，mL；
V₃—粗多糖溶液体积，mL； V₄—测定用样品液体积mL;
V₂—沉淀粗多糖所用样品提取液体积，mL。
四、验证数据
1.线性范围
1.1 标准曲线绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液（4.2.4）0mL、0.10mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL置于25mL比色管中，补加水至2.0mL，加入5%苯酚溶液（4.2.2）1.0mL，在漩涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸（4.1.4）10mL，在漩涡混合器上小心混匀，置于沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖质量（C）为横坐标，吸光度值（A）为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程：A=2.6991×C R²为0.9996。

2 重复性
称取6份试样按照上述处理方法进行试样处理，分别吸取适量样液进行比色，代入标准系列回归方程中求得样液中粗多糖浓度。

由上表可知，芝神堂牌富硒灵芝破壁孢子粉中硒测定的重复性均值为1.047g/100g，RSD值为0.738%，符合规定。
3.回收率
进行6组平行试验，同时进行加标试验，结果见下表：

由上表可以看出粗多糖测定的标准偏差为：0.738%；加标回收在90%-120%之间。

综上所述：从线性、重复性、回收率测试结果可知，均符合方法要求。

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逆天一棍

第1楼2017/09/08

国标上规定的回收率范围在多少？

0

zyl3367898

第2楼2017/10/04

应助达人

有要注意的问题吗？

0

yy_0324

第3楼2017/10/05

保健食品介绍的详细全面是一篇优秀文章。
逆天一棍(fengmo4668)发表:国标上规定的回收率范围在多少？

0

yifan1117

第4楼2017/10/05

不错，比较详细全面。

0

symmacros

第5楼2017/10/05

应助达人

请问粗多糖的意义是什么？在食品中的主要作用是什么？

0

huangza

第6楼2017/10/09

应助达人

有错别字，不是硒吧？

0

yy_0324

第7楼2017/12/20

学习了粘多糖的测定方法。

0

月亮下的猫

第8楼2018/02/13

加标回收率酸法应该是这样吧：测得的加标量/加标量*100。

0

月亮下的猫

第9楼2018/02/13

楼主可曾隔几天后再测粗多糖，其再现性如何？我公司生产的保健品每次测时精密度都较好，可过段时间回测再现性欠佳。我们用的是紫外分光光度计测得，每次都是先走工作曲线再测样品，相关系数一般在两个九，达三个九的几率较少，一直为此事头疼。几个检测人作此实验都是如此。可我们作氨氮，磷，硒等其他工作曲线，R很轻松达三个九以上，可以排除人员因素。另外我们是手摇比色管混匀，还有我们没有放置冰箱于4摄氏度放4小时之一步骤（我公司依据检测标准也没这一步骤）。

0

yy_0324

第10楼2018/02/13

多了解粗多糖，知道了粗多糖在食品中作用巨大！

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