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关于峰展宽的故障排查

  • 你一见我就笑2169
    2017/10/12
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 最近,连续遇到同一产品峰展宽的现象,具体详情和谱图见附件,烦请各位帮忙分析一下原因,谢谢!

    峰展宽故障排查



    1、事情经过
    10.09新配制流动相;10.10分析样品,发现峰展宽,重新配制流动相A,更换,峰形恢复正常;
    10.11新配制流动相A,分析其他产品使用; 10.12分析该样品,再次发现峰展宽,重新配制流动相A,更换,峰形恢复正常;
    以前使用的流动相更换频次很低,经常十天半个月不更换,从未出现类似情况。
    2、色谱条件
    色谱柱: Waters X-Bridge C18 150mm*4.6mm 5μm
    流动相: A、0.1%磷酸水溶液 B、乙腈; A、3% B、97%; 等度运行;
    流速: 0.7ml/min;
    柱温箱: 35℃;
    检测波长:284nm;
    进样量: 20μl;
    运行时间:40min;
    3、个人分析
    两次均是更换流动相A之后,恢复正常,应该是流动相A的问题。
    流动相A配制时使用量筒,移取磷酸使用的是移液枪。 直观表现:更换流动相A前后,压力略有差异。
    个人怀疑:问题可能出在流动相A的磷酸浓度的微小差异。
    但是考虑到,磷酸的浓度本身就很小0.1%,再者,色谱条件为等度,且A仅占3%,又怀疑磷酸浓度的微小差异会对其峰形造成如此大的影响?是否有些矛盾?
    4、说明
    图1:10.10和10.12两次测试中,峰展宽的色谱图对比。峰高在800~900,峰面积34000~35000,压力~28。
    图2:10.10和10.12两次测试中,更换流动相A之后的色谱图。峰高在1200~1300,峰面积34000~35000,压力~26。
    图3:10.12更换流动相前后,色谱图对比;
    图4:图3的局部放大图;
    图5:10.10和10.12两次测试中,更换流动相A前后的压力曲线图。




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  • 夏天的雪

    第1楼2017/10/12

    应助达人

    可能是pH引起的,也可能是柱平衡的原因,更换前后是否就是直接代替,中间是否进行过色谱柱的清洗?建议,可以考察一下新旧流动相的pH值,看pH值是否有变化,如果刚好处于临界点的时候,或许会出现这种情况,此时可以将酸度调大一些。

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  • moviehua

    第2楼2017/10/13

    应助工程师

    可以考虑将AB相互换看看是否可以改善。应该是系统达到了某种平衡。

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  • moviehua

    第3楼2017/10/13

    应助工程师

    有任何进展希望可以分享一下,谢谢!

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  • hujiangtao

    第4楼2017/10/16

    应助达人

    峰展宽一般是柱效降低了

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  • 你一见我就笑2169

    第5楼2017/10/16

    更换前后未做冲洗,均是直接替换,基线平衡之后,运行样品。
    流动相A是0.1%磷酸的水溶液,pH是否可以测出?即使是由于移液枪误差造成的磷酸的浓度有差异,如此低的比例如何考察?

    夏天的雪(bingwang228) 发表:可能是pH引起的,也可能是柱平衡的原因,更换前后是否就是直接代替,中间是否进行过色谱柱的清洗?建议,可以考察一下新旧流动相的pH值,看pH值是否有变化,如果刚好处于临界点的时候,或许会出现这种情况,此时可以将酸度调大一些。

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  • 你一见我就笑2169

    第6楼2017/10/16

    该产品极性较强,开发方法时,也是费了好长时间,最终确定的这个条件,峰形也不太好,较其它物质峰较宽,对称性也不是特别好。但是现在的问题是,更换流动相A前后,峰形差异很大。因此,个人怀疑还是使用移液枪加磷酸造成的浓度有微小差异,对于别的产品影响不大;对于该产品,可能自身峰本身就不大好,因此酸浓度的微小差异带来的影响就凸显出来了。
    个人观点,不知道是否讲得通,因此和大家讨论一下。

    hujiangtao(hujiangtao) 发表:峰展宽一般是柱效降低了

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  • 你一见我就笑2169

    第7楼2017/10/16

    个人不理解的是,两次更换流动相之前(峰形异常)的压力曲线重叠性很好,两次更换之后(峰形正常)的压力曲线重叠性也很好,更换前后对比,均有差异。不知此压力变化是否跟这个结果有必然联系?又是什么原因造成的压力的不同?

    hujiangtao(hujiangtao) 发表:峰展宽一般是柱效降低了

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  • 夏天的雪

    第8楼2017/10/17

    应助达人

    可以用酸度计进行测量pH,可以看一下酸度影响大不大

    你一见我就笑2169(v2650137) 发表: 更换前后未做冲洗,均是直接替换,基线平衡之后,运行样品。
    流动相A是0.1%磷酸的水溶液,pH是否可以测出?即使是由于移液枪误差造成的磷酸的浓度有差异,如此低的比例如何考察?

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  • 夏天的雪

    第9楼2017/10/17

    应助达人

    压力肯定是有影响的,将压力曲线上图看看,或者与压力有关,但是什么原因造成的压力值不同又得排查,建议预混流动相进行测试,然后进行对比

    你一见我就笑2169(v2650137) 发表:个人不理解的是,两次更换流动相之前(峰形异常)的压力曲线重叠性很好,两次更换之后(峰形正常)的压力曲线重叠性也很好,更换前后对比,均有差异。不知此压力变化是否跟这个结果有必然联系?又是什么原因造成的压力的不同?

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  • flyaway

    第10楼2017/10/18

    先测个柱效和以前的结果比较一下,柱效明显下降就是柱子问题,反之再考虑流动相的变化

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