移动相组成 想获得重复性好的结果就需要在移动相混合配制时采用称量法。在配制水/乙醇30/70（体积比）溶液时，称取300.0克（300 mL X 1.0 g/mL）水同546.0克（700 mL X 0.78 g/mL）乙醇相混合。 特别是将脂肪醇当作极性添加组分时，避免采用高效液相色谱将添加组分直接在线泵入与溶剂主成分混合。 使用每次新鲜配制的移动相，双组分移动相的组成常会因为挥发原因而发生改变。 温度漂移 5℃上下的偏差会导致样品保留时间上+/-10%左右的漂移。即使在常规温度下工作也建议使用色谱柱温箱。 pH控制 酸性和碱性样品的保留时间视pH环境而定。0.1个pH单位会导致保留时间发生10%的漂移。因此建议pH工作环境至少保持在样品pKa的2个pH单位区间外。 平衡不完全 建议至少使用10倍柱体积的移动相对反相色谱柱进行平衡操作，针对含有缓冲成分的移动相则在分析操作前至少需要20倍柱体积的平衡工作容量。确保所有移动相路径均经过足够的移动相涤洗。正相色谱柱需要耗费10倍于反相色谱柱的平衡时间。纯硅胶基质色谱柱可能的平衡时间长达数小时，特别要留意正相体系中的水份含量。多数可重复的结果都是特意在移动相中添加0.05%的水份后取得的。 去润湿化 高极性移动相可以被从填料微球的憎水性内孔系统内排斥出来，导致微球可接触的表面积越来越少，由此导致保留时间的逐渐变少。参见“预装色谱柱能在100%水溶液组成的移动相中工作吗？”
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