【科普】SCX：磺酸基阳离子交换色谱柱的使用及维护——盐酸二甲双胍分析例合辑

SCX：磺酸基阳离子交换色谱柱的使用及维护

——盐酸二甲双胍分析例合辑

Metformin

二甲双胍

双氰胺也得到充分保留，与溶剂峰基本分离。

▲系统适用性图谱

*峰1：三聚氰胺，峰2：二甲双胍，峰3：双氰胺

▲系统适用性图谱

▲双氰胺图谱

敲黑板！使用100mm柱长进行分析，每针分析时间仅需40min，和150mm柱长结果相比，分析效率又有了显著提升~

▲二甲双胍与相关杂质的分离

▲充分平衡前后的基线对比

▲经过30h的平衡，基线良好，二甲双胍峰形正常

-关于SCX柱流动相置换-

-SCX色谱柱保存液置换流程-

-SCX柱保存-

2. 色谱峰峰形异常——冲洗

在实际样品分析中，色谱柱在经过一段时间的使用后，可能会出现峰形变差的现象，通常是样品基质或杂质在色谱柱中蓄积或盐析带来的影响。

▲峰形变差（客户反馈）

上图为客户反馈的峰形变差色谱柱，将该柱寄回实验室，进行柱效测定的结果如下图，峰形变差，理论塔板数降低明显。

▲柱效测定结果

▲柱头颜色发暗，有白色结晶，怀疑为盐析

-解决方案-

▲经过冲洗后得到恢复的柱效测定结果

-如何避免盐析-

3. 杂质分离度不佳——调整方法

-杂质B和C的分离-

▲杂质B、C峰完全重合

色谱柱 ：CAPCELL PAK SCX UG80 S5; 4.6 mm i.d. × 150 mm

流动相 ：4% 磷酸二氢铵（pH 3.0）

流　速 ：1.0 mL/min

柱　温 ：35 °C

波　长 ：218 nm

样　品 ：客户提供系统适用性样品

进样量 ：20 μL

-解决方案-

▲调节pH对杂质B、C分离度的影响

-主峰与杂质E的分离-

如下图，客户使用250mm柱长的SCX色谱柱进行分析，二甲双胍主峰与杂质E的分离效果不理想。

▲系统适用性图谱-二甲双胍与杂质E分离不理想

色谱柱 ：CAPCELL PAK SCX UG80 S5; 4.6mm i.d. × 250 mm

流动相 ：1.7% 磷酸二氢铵（磷酸调节pH3.0）

流　速 ：1.0 mL/min

柱　温 ：25 °C

波　长 ：218 nm

样　品 ：客户制备提供

进样量 ：10 μL

-解决方案-

▲系统适用性图谱-调节pH对分离度的影响

*SCX色谱柱的pH使用范围为2-7，在pH2.0条件下可以稳定使用。

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以上就是使用SCX色谱柱分析例及使用注意事项的汇总，以盐酸二甲双胍这一典型项目为分析例进行了详细说明。
接下来，对于二甲双胍这个项目，还有个发散出来的分支数据——不使用SCX色谱柱，也可以分析吗？
感兴趣就往下翻吧~

使用离子交换色谱柱分析，平衡时间太长，如果不拘泥于药典方法，也可以选择CAPCELL PAK大家族里的另一款奇葩——键合立体笼状结构の金刚烷基色谱柱——CAPCELL PAK ADME，也能得到良好分离与保留~

▲系统适用性图谱-ADME色谱柱

*峰上标数字由下至上依次为理论塔板数、分离度与不对称因子

色谱柱 ：CAPCELL PAK ADME S5; 4.6mm i.d. × 250 mm

流动相 ：20mmol/L 磷酸二氢钠水溶液

流　速 ：1.0 mL/min

柱　温 ：35 °C

波　长 ：225 nm

样　品 ：双氰胺、三聚氰胺和二甲双胍浓度均为0.01mg/ml（50%甲醇溶解，流动相稀释）

进样量 ：5 μL

使用ADME色谱柱进行分析，平衡时间较短，且能保证良好保留与分离~是不是很优秀~