光片照明显微镜——细胞级分辨率3D成像

（A）7周龄胚胎的表面造影图像（左）；对Prph进行标记所得图像。

（B）8周龄胚胎的表面造影图像（灰色）和标记Prph所得图像（绿色）的叠加图像。

（C）8周龄胚胎的面部神经分布。表面造影图像和标记Prph所得图像的叠加（中）（右）。

感觉神经轴突和运动神经轴突在手脚的分布：分别使用胆碱乙酰转移酶（ChAT）和瞬态粘附糖蛋白-1（Tag-1）的抗体来标记。

（D）在外周神经，染色产生重叠现象，但在末端Tag-1（绿色）更为明显。（D-F）ChAT染色与Prph和Tag-1均无重叠。

（D）9.5周龄的拇指，标记Prph和Tag-1。染色发生重叠，但在末端区域Tag-1更显著。

（E）9.5周龄的左手，ChAT与Prph表达区域不同。

（F）9周龄的右脚，ChAT与Tag-1表达区域不同。

（G）7周龄的头部，标记Prph显示颅神经。（右）对颅神经分布使用Imaris软件进行3D虚拟解剖、区分并着色。

（A）8周龄标记Prph的右手，感觉神经分为尺骨神经、正中神经和桡神经。

（B）右手从7周龄到11周龄的神经分布随时间的变化。肌皮神经（指针处）很快便延长深入手部。

之后分别对ChAT和Tag-1标记，建立了运动和感觉神经的分布的图像，以确定两种神经在何处以何种方式分离。

（C）（D）9周龄的右脚和8周龄的左手的感觉神经和运动神经的3D图像。

（A）9.5周龄标记Pax7的右脚和右手。

（B）10.5周龄标记Pax7与ChAT的右脚。

（C）9周龄标记Myog、ChAT和Tag-1的右脚。

表达Myog的细胞成簇分布于运动神经分支末端。

（D）9.5周龄的左脚标记Dcx与ChAT。

Dcx在肌肉（*号）和感觉神经中检测到，但在运动神经轴突中未检测到。

（E）8周龄标记MHC与Tag-1的胚胎。

（中上）动眼肌肉的图像。

点状线标示出了肌肉的分界线，此处照明被色素上皮所减弱。

（中下）肌肉与感觉神经。（右）左臂的肌肉与感觉神经。

（F）9.5周龄标记MHC与ChAT的左手，显示了肌肉与运动神经。

使用不同颜色对肌肉进行了区分，同时能够观察到正在发育的骨骼。

（A）（B）8周龄标记Plvap的胚胎。

Plvap在整个胚胎中形成了致密的网络。

（A中、右）右臂与右手。（B左）左腿的Z轴投射图像。

（*号）血管网络穿过了除了骨骼的所有组织。

（B右）面部图像。（箭头）角膜处没有血管。

（C）11周龄胎儿，标记胶原IV的肋骨表面。

（D左）11.5周龄胎儿的右腿和右膝，标记MyoSM的动脉。

（D右）11.5周龄胎儿的右脚，标记SMA的动脉。

对胃肠道的淋巴细胞表达的Podoplanin进行标记以研究淋巴管形成，表达Podoplanin的细胞覆盖了肠胃，

而含Podoplanin的微管数量较少，说明人类淋巴系统成熟可能晚于血管系统。

（E）14周龄标记Podoplanin的消化道。表达Podoplanin的细胞位于肠胃上方。

（右）表达Podoplanin的细胞尚未发育形成淋巴管。

（A）9.5周龄标记Sox9、Dcx和Plvap的胎儿的肺部。Sox9在上皮小管的末端表达，Dcx在近端表达。Plvap在整个肺的血管中表达。

（B）肺上皮小管Z轴光学切面。

（C）末端的微血管网络。

（D）气道分支的3D图像。肺叶（蓝绿），支气管（红）。

（E）支气管的3D图像。（右）三种分支方式。

标记SMA和平滑肌肌凝蛋白（MyoSM），两者均于围绕支气管和气道上皮小管的平滑肌处表达。标记Sox9显示出末端没有平滑肌。

对平滑肌进行染色同时可以显示动脉和微动脉。可以使用SMA和酪氨酸羟化酶（TH）标记心脏来观察血管和神经分布。

（F）9.5周龄的标记MyoSM的肌凝蛋白平滑肌的染色。（箭头）支气管及分支。

（G）11.5周龄的左肺标记SMA显示出气道平滑肌的分支方式。（箭头）动脉周围肌肉和（指针）近端气道周围肌肉。

（H）10周龄的肺的分支图像。末端芽部用Sox9标记。表达SMA的平滑肌分布于不表达Sox9的近端区域。

（I-K）心脏的光片显微图像。

（A）8周龄标记Pax2的胚胎。

（B）（箭头）MD/WD连接。

（C）（D）9.5周龄的泌尿生殖系统。（箭头）MD尾端沿WD延长但仍未融合。

（E）10周龄的泌尿生殖系统。MD在底端融合（指针）并开始降解（箭头）。

（F）降解的继续。

（G）14周龄的泌尿生殖系统。输精管进一步发育（指针）。

（H）10周龄标记Pax2和Sox9的睾丸。

（I）10周龄标记Pax2的睾丸。

（J）14周龄的睾丸。

（A）10.5周龄标记Pax2的泌尿生殖系统。WD连续，MD已融合。

（B）11.5周龄标记Pax2的生殖系统。（箭头）WD开始降解。

（C）13周龄，标记Pax2的生殖系统。（箭头）子宫大小增加，WD显著降解。（右）MD顶端发育中的输卵管纤毛。

（D）8周龄标记Pax2和Plvap的睾丸。（指针）微血管覆盖了睾丸和WD。而MD却没有血管形成。

（E）10周龄的雄性胎儿中，MD没有微血管形成。

（F）（G）10.5和13周龄标记Pax2和Plvap的卵巢。WD和MD均有致密的血管覆盖。