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酶联免疫吸附法测定猪肉猪尿中盐酸克伦特罗的检测进展

我愿随风飞

2018/10/12
分析者端木凯旋队

兽药/抗生素检测

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assy，ELISA)技术是1971年由Engvall和Perlman 建立的一种生物活性物质微量测定新技术，以其灵敏度高﹑特异性好等优点,在生命科学各领域得到广泛应用。近年来，该技术不断改进，形成了多种分析方法，并且在检测的灵敏度﹑特异性﹑操作简单化﹑高效性等方面都有很大提高。ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法。
猪肉猪尿中盐酸克伦特罗（CLB)俗名“瘦肉精”，是一种化学合成类物质，曾被国内外当作“促生长剂”和“营养重分配剂”被广泛用于生猪的饲养中，以促进家畜生长，提高瘦肉率，从而获取更大的经济利益。人若食用过量CLB的食品，会引起一系列的心血管系统和神经系统的不良反应症状，严重危害人体健康。因此，各国政府都禁止CLB作为饲料添加剂用于肉用动物的生产中。检测CLB的常用方法有高效液相色谱法（HPLC）﹑气质联机法（GC-MS）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。其中克伦特罗单克隆抗体ELISA试剂盒的应用，打破了CLB残留的检测仅限于拥有先进仪器的检测单位能够检测的现状，使得基层单位﹑生产企业现场快速检测成为可能，扩大了我国CLB残留的检测范围和检测数量，使得国家兽药残留监控计划得到更好的实施。
1 ELISA测定原理
利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用，通过化学方法将植物辣根过氧化物酶（HRP）与克伦特罗(CL)结合，形成酶偶联克伦特罗。将故乡载体上已包被的抗体（羊抗兔IgG)与特异性的抗克伦特罗抗体结合，然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗，它们竞争性与克伦特罗抗体结合，洗涤后加底物，根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多，则被结合的酶偶联克伦特罗少，有色物量就少。用目测法或比色法测定样品中的克伦特罗含量，比色的最佳波长为450nm，参比波长应大于600nm。
2 ELISA测定误差分析及解决方法
目前ELISA法测定克伦特轮最常见的问题就是“假阳性”现象。造成的原因有试剂盒，样品处理，实验操作，环境等方面的因素，产生误差，对结果有一定影响。现将情况列举一﹑二，供参考：
2.1 不同厂家的酶联免疫试剂盒产生的差异
在检测中，首先要查看试剂盒的检测对象，检测肉组织，尿液样品等，不要使用非同一
试剂盒中的微板孔。酶联免疫试剂盒有一定的准确度，一般组织为±20%的偏差，尿液为±15%的偏差，不能够作为定量检测方法，只能用作筛选方法。
2.2 样品处理产生误差
对于处理样品带有低脂肪的肉或组织，需要经过均质，离心，混合，再离心等一系列步骤才能取得最终样品。
2.2.1均质不充分
样品没有完全粉碎，与盐酸试剂可能没有充分混合，导致提取的“瘦肉精”丧失了小部分，可使实验结果偏低。
2.2.2 取样不具有代表性或不均匀
主要表现在肝等实质器官，在采样时取了吸收“瘦肉精”能力较差的部位，可导致最终结果偏低。
2.3 操作程序偏差
由于操作过程的主观原因，可造成各种误差。
2.3.1加样（试剂）不完全，操作不稳定，一些样品（试剂）会留在微孔的边缘上，比如在加抗体溶液时不完全，可是最终测得结果（盐酸克伦特罗含量）偏高，加入标准或处理好的样品或基质，显色底物试剂不完全，也可使最终结果偏低。
2.3.2在加样时，有的枪头会留有一滴液体，造成每个微孔中加入液体体积不一致，最终会出现标准曲线的线性不好或平行性不好的现象。
2.4洗板不规范可影响结果
若加样时将液体溅入另一孔中，人工洗板时若不小心将洗涤液溅入另一孔中，造成的酶标记板孔间相互污染也可影响检测结果。
3 小结
目前通常以ELISA作为猪肉猪尿中盐酸克伦特罗检测的筛选方法，以高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）和气相色谱-质谱联用法（GC-MS）作为确认方法。ELISA法以其特异性﹑高效性﹑简单化等特点作为检测猪肉猪尿中盐酸克伦特罗的一种方法在实验室中得到广泛使用。

附件：

酶联免疫吸附法测定猪肉猪尿中盐酸克伦特罗的检测进展.docx

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颜苏翎

第1楼2018/10/12

不错不错，很实用，棒棒的

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Better521

第2楼2018/10/12

非常实用的一篇文章，楼主总结的非常到位。

0

端木

第3楼2018/10/15

不错，加油哦

0

栀子花开

第4楼2018/10/18

应助达人

做了8年左右的瘦肉精试剂盒，都没想到好好总结一下质量控制要点，惭愧

0

沧海青城

第5楼2018/10/25

应助达人

非常不错的原创

0

zyl3367898

第6楼2018/11/02

应助达人

再加些图片最好。

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