水质粪大肠菌群测定方法验证报告

承之

2018/10/31

私聊

水质检测

检验标准：HJ/T 347-2007

仪器设备：生物安全柜SZSB-286，电热恒温培养箱 SZSB-310，微生物显微镜 SZSB-098
主要试剂：（1）乳糖蛋白胨培养液批号：120409 产地：北京
（2）EC肉汤批号：120219 产地：北京
1. 验证样品的制备：
无菌操作取样品100ml加入到装有适量玻璃珠的灭菌三角瓶内，充分振荡混匀，共制做三份，作为验证用供试液。
2 验证用菌液的制备
分别取大肠埃希氏菌（ATCC 25922），金黄色葡萄球菌（ATCC 6538），经36℃培养18〜24h新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养18～24小时，分别用0.85%灭菌生理盐水按10倍稀释法逐级稀释菌液，选择浓度为50〜100cfu/ mL的菌液备用。
3 实验操作
3.1 取制备好的三份100ml供试液，一份不加菌作为供试品检查，一份加入1ml（50〜100cfu/ml）大肠埃希氏菌菌液作为试验组，一份加入1ml（50〜100cfu/ml）金黄色葡萄球菌菌液作为阴性对照。
3.2 用1mL灭菌吸管吸取上述制备样液1mL，注入到含有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混匀，制成1:10的稀释液。按同样方法依次做10倍递增稀释液。
3.3 分别取制备样液10mL、1mL，1:10制备样1mL接种于乳糖蛋白胨培养液发酵管内，每个稀释度接种5根管，接种10mL的用含5ml三倍乳糖蛋白胨培养液发酵管，接种1ml的用单倍乳糖蛋白胨培养液发酵管，将发酵管置37℃恒温箱内培养24h。
3.4 将3.3中产气的发酵管，分别用接种环沾取一环接种至EC肉汤发酵管中，置44.5℃恒温培养24h后。观察产气情况。根据产气情况报告粪大肠菌群阳性或阴性。
3.5 以上试验重复进行三次。
4 实验结果判断依据
粪大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。乳糖蛋白胨培养液发酵产酸产气，EC肉汤发酵管复发酵产气者可判断为粪大肠菌群阳性。
根据粪大肠菌群阳性管数，检索MPN表，报告每100ml样品中粪大肠菌群的MPN值，也可按照标准的要求，乘以相应的稀释倍数，换算成每L样品中粪大肠菌群的MPN值。
5 记录及报告
第一次试验

实验组别	阳性管数						结果 MPN/100ml
	乳糖蛋白胨培养液初发酵			EC肉汤复发酵
	10ml*5	1ml*5	0.1ml*5	10ml*5	1ml*5	0.1ml*5
供试品组	0	0	0	/	/	/	<2
实验组	5	1	1	5	1	1	46
阴性对照组	0	0	0	/	/	/	<2

第二次试验

实验组别	阳性管数						结果 MPN/100ml
	乳糖蛋白胨培养液初发酵			EC肉汤复发酵
	10ml*5	1ml*5	0.1ml*5	10ml*5	1ml*5	0.1ml*5
供试品组	0	0	0	/	/	/	<2
实验组	5	1	0	5	1	0	33
阴性对照组	0	0	0	/	/	/	<2

第三次试验

实验组别	阳性管数						结果 MPN/100ml
	乳糖蛋白胨培养液初发酵			EC肉汤复发酵
	10ml*5	1ml*5	0.1ml*5	10ml*5	1ml*5	0.1ml*5
供试品组	0	0	0	/	/	/	<2
实验组	5	2	0	5	2	0	49
阴性对照组	0	0	0	/	/	/	<2

6 结论
根据HJ/T 347-2007标准要求及方法学验证依法检查在3次独立的平行试验中，在供试品组粪大肠菌群阴性，MPN值<2MPN/100ml，阴性对照组粪大肠菌群阴性，MPN值<2MPN/100ml的同时，试验组粪大肠菌群阳性，MPN值分别为46MPN/100ml、33MPN/100ml、49MPN/100ml。方法具有专属性，符合方法学验证规定。
故我公司对医疗废水中粪大肠菌群的测定符合标准HJ/T 347-2007的要求。