茶叶中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法解决方案

微雨燕双飞

2018/12/25

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草甘膦(Glyphosate，Gly)是广泛使用的一类广谱非选择性除草剂，以其高效、廉价等特性被运用于全球各个农业和非农业领域。其在环境和生物体中富集并通过食品进入人体，会对人体健康造成危害。随着其在茶叶上的广泛使用，草甘膦及其主要代谢产物氨甲基膦酸残留问题也越来越受关注。目前常用的检测方法为离子交换净化、七氟丁醇(HFB)和三氟乙酸酐(TFAA)衍生后GC-MS检测，或9-芴基甲基三氯甲烷衍生后LC-MS/MS检测，这些方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题，因此建立一种简便、快捷、有效的草甘膦及其代谢物残留的检测方法具有重要的意义。
迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定茶叶中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的检测方法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取专用柱净化样品，收集流出液，Dikma Polyamino HILIC色谱柱分离检测，该方法特点：
1) 前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可；
2) 有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂；
3) 仪器分析简单，样品无需衍生直接分析，可提高结果稳定性及减少实验成本；
4) 方法定量限0.1 mg/kg。
以下为详细解决方案，敬请参考！

茶叶中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法

1、适用范围
本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.1 mg/kg。
2、标准品配制
单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。
混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 μg/mL、10 μg/mL和50 μg/mL的混标标准中间液。
3、提取
取1 g茶叶于50 mL离心管中，准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取5 mL上清液，待净化。
4、净化——ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938）
(1)活化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；
(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 μm尼龙滤膜，上机分析。
注：同方法制备基质匹配标准溶液。
5、UPLC-MS/MS条件
5.1 UPLC 条件
色谱柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)
流速：0.2 mL/min 进样量：10 μL 柱温：35 ℃
流动相： A：乙腈 B：5 mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11
梯度设置：

Time（min）	0	2	2.1	8	8.1	15
A（%）	80	80	20	20	80	80
B（%）	20	20	80	80	20	20

5.2 质谱条件

电离模式：ESI	扫描方式：负离子扫描
检测方式：多反应监测	电喷雾电压：-4500 V
雾化气压力：60 psi	辅助气压力：60 psi
气帘气压力：35 psi	离子源温度：550 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

目标化合物	定性离子对（m/z） (母离子/子离子)	定量离子对（m/z） (母离子/子离子)	碰撞气能量/eV	去簇电压/V
氨甲基膦酸	109.9/62.8	109.9/62.8	-23	-53
氨甲基膦酸	109.9/78.9	109.9/62.8	-35	-51
草甘膦	167.8/62.8	167.8/62.8	-30	-50
草甘膦	167.8/81.0	167.8/62.8	-21	-31

6、添加回收结果
茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS检测添加回收结果：

样品基质	回收率（%）
	添加水平：0.1 mg/kg		添加水平：1 mg/kg		添加水平：5 mg/kg
	加标量：1.0 μg/mL，加100 μL		加标量：10 μg/mL，加100 μL		加标量：50 μg/mL，加100 μL
	氨甲基膦酸	草甘膦	氨甲基膦酸	草甘膦	氨甲基膦酸	草甘膦
绿茶	103	91	99	109	92	101
花茶	95	105	109	85	93	99
铁观音	84	81	83	94	80	100
红茶	100	101	86	85	89	98
普洱茶	80	95	89	95	88	102

茶叶中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息：

货号	名称	规格
样品前处理
65938	草甘膦检测专用固相萃取柱 ProElut GLY	6 mL, 30/pk
244358	12管防交叉污染真空SPE萃取装置	12位
4803	1,3,6 mL柱管通用连接器	15/pk
4806	考克(控制流量)	15/pk
99011	真空/正压两用泵，无油	1/pk
99013	抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞)	1/pk
30039	FitMax针头式过滤器 Nylon	13 mm, 0.22 μm 100/pk
标准品
12-MET-12133A-100MG	氨甲基膦酸	100 mg
46010	草甘膦	100 mg
色谱柱及保护柱
99302	Dikma Polyamino HILIC	150 x 2.0 mm, 5 μm
HPLC溶剂·缓冲盐·离子对试剂
50101	乙腈 HPLC级	4 L
50102	甲醇 HPLC级	4 L
50117	二氯甲烷 HPLC级	4 L
50138	乙酸铵 HPLC级	100 g
通用色谱产品
52401B	瓶架/蓝色（现货）	50孔
52401A	瓶架/白色（现货）	50孔
1034	样品瓶（棕色/螺纹）	2 mL, 100/pk
1035	样品瓶盖/含垫（已经组装）	100/pk
H80465	HPLC 进样针	25 μL