二维相关分析用于pH引起的人血清白蛋白二级结构变化的研究
表4-1 实验仪器与软件
仪器/软件 | 规格与型号 | 生产厂家 |
电子分析天平 | ME54E | 梅特勒-托利多仪器股份有限公司 |
磁力搅拌器 | 温控型 | 巩义市予华仪器有限责任公司 |
pH计 | FE20型 | 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司 |
1000μL、100μL | 美国Thermo Fisher公司 | |
容量瓶 | 500mL | 四川蜀牛玻璃仪器厂 |
烧杯 | 500mL、50mL | 四川蜀牛玻璃仪器厂 |
傅里叶变换红外/拉曼联用光谱仪 | NXR FT-RAMAN型6700FT-TR | 美国Nicolet公司 |
MATLAB数据处理软件 | 2015a | 美国Mathworks公司 |
表4-2 实验材料与试剂
试剂/材料 | 规格/批号 | 生产厂家 |
人血清白蛋白(Albumin human) | A9731-5G | Sigma-Aldrich公司 |
二水合磷酸二氢钠 | 分析纯 | 国药集团化学试剂有限公司 |
十二水合磷酸氢二钠 | 分析纯 | 国药集团化学试剂有限公司 |
磷酸 | 分析纯 | 国药集团化学试剂有限公司 |
图4-1pH 3.0-7.2的HSA 磷酸盐溶液的经过SNV处理之后的光谱图
图4-2 HSA 磷酸盐溶液在波长为1750-1580cm-1段的差谱图
图4-3 pH7.0-3.0范围的的HSA的连续小波变换光谱
表4-3 HSA的分辨出主要吸收峰
峰的波数(cm-1) | 归属情况 |
1745 | 自由COOH基团 |
1732/1722 | 半氢键结合的COOH基团 |
1711 | 弱氢键结合的COOH基团 |
1702 | 中等强度氢键结合的COOH基团 |
1695 | 强氢键结合的COOH基团 |
1680 | β-转角 |
1667 | β-转角 |
1653 | α-螺旋 |
1625 | β-折叠链 |
1613 | Side chains |
1598 | COO- |
图4-4 pH 7.2-5.0范围内HSA磷酸盐溶液的二维相关同步谱(左)和异步谱(右),横、纵坐标均为波数Wavenumber(cm-1)
表4-4 根据同步谱/异步谱得到的交叉峰信息及根据Noda原则得出的pH7.2-5.0的范围内可以分辨的吸收峰的变化顺序
峰(cm-1) | Ф | ψ | 变化顺序 |
1739,1628 | + | - | 1628>1739 |
1716,1628 | 0 | - | — |
1739, 1682 | + | + | 1739>1682 |
1682,1671 | - | - | 1682>1671 |
1671,1653 | + | - | 1653>1671 |
1682,1653 | - | + | 1653>1682 |
1739,1653 | + | + | 1739>1653 |
1716,1653 | + | + | 1716>1653 |
1727,1653 | - | + | 1727>1653 |
1700,1653 | + | - | 1700>1653 |
1671,1609 | + | + | 1609>1671 |
1637,1609 | + | - | 1609>1637 |
1682,1609 | - | - | 1682>1609 |
1671,1624 | + | - | 1624>1671 |
1624,1609 | + | - | 1609>1624 |
1671,1594 | + | - | 1594>1671 |
1682,1594 | - | - | 1682>1594 |
1609,1594 | + | + | 1609>1594 |
1624,1594 | + | - | 1594>1624 |
1653,1594 | + | + | 1653>1594 |
1653,1637 | + | + | 1653>1637 |
1637,1609 | + | - | 1609>1637 |
1637,1594 | + | - | 1594>1637 |
1637,1624 | + | - | 1624>1637 |
1671,1637 | + | - | 1637>1671 |
图4-5 pH5.2-4.4范围内的二维相关同步谱(左)和异步谱(右),横、纵坐标均为波数Wavenumber(cm-1)
表4-5 根据同步谱/异步谱得到的交叉峰信息及根据Noda原则得出的pH5.2-4.4的范围内可以分辨的吸收峰的变化顺序
峰的波数(cm-1) | Ф | ψ | 变化顺序 |
1733,1720 | 0 | - | — |
1720,1653 | + | + | 1720>1653 |
1697,1653 | - | - | 1697>1653 |
1653,1607 | + | + | 1653>1607 |
1607,1591 | + | - | 1591>1607 |
1653,1591 | + | - | 1591>1653 |
1697,1591 | - | - | 1697>1591 |
1626,1607 | + | - | 1607>1626 |
1636,1626 | + | + | 1636>1626 |
1607,1636 | + | + | 1636>1607 |
1636,1626 | + | + | 1636>1626 |
1653,1636 | + | + | 1653>1636 |
1671,1626 | + | + | 1671>1626 |
1671,1653 | + | + | 1671>1653 |
1671,1591 | + | - | 1591>1671 |
图4-6pH4.6-3.8范围内的二维相关同步谱(左)和异步谱(右),横、纵坐标均为波数Wavenumber(cm-1)
表4-6 根据同步谱/异步谱得到的交叉峰信息及根据Noda原则得出的pH4.6-3.8的范围内可以分辨的吸收峰的变化顺序
峰的波数(cm-1) | Ф | ψ | 变化顺序 |
1697,1677 | + | - | 1697>1677 |
1677,1668 | + | - | 1677>1668 |
1668,1648 | + | - | 1648>1668 |
1677,1648 | + | - | 1677>1648 |
1668,1636 | + | - | 1636>1668 |
1648,1636 | + | + | 1648>1636 |
1668,1636 | + | - | 1636>1668 |
1668,1682 | + | - | 1668>1682 |
1682,1611 | + | - | 1611>1682 |
1668,1611 | 0 | + | — |
1636,1611 | + | + | 1636>1611 |
1611,1682 | + | - | 1682>1611 |
1682,1636 | + | - | 1636>1682 |
1611,1604 | + | 0 | 可能来自于同一基团 |
图4-7 pH3.8-3.0范围内的二维相关同步谱(左)和异步谱(右),横、纵坐标均为波数Wavenumber(cm-1)
图4-8 pH3.8-3.0范围内的同步谱的透射图,x、y轴均为波数Wavenumber(cm-1),z轴为相对强度)
图4-9pH3.8-3.0范围内的异步谱的透射图,x、y轴均为波数Wavenumber(cm-1),z轴为相对强度
表4-7 根据同步谱/异步谱得到的交叉峰信息及根据Noda原则得出的pH3.8-3.0的范围内可以分辨的吸收峰的变化顺序
峰的波数(cm-1) | Ф | ψ | 变化顺序 |
1656,1648 | + | + | 1656>1648 |
1648,1640 | + | - | 1640>1648 |
1656,1640 | + | 0 | — |
1648,1633 | + | - | 1633>1648 |
1656,1633 | + | + | 1656>1633 |
1648,1614 | + | - | 1614>1648 |
1633,1614 | + | - | 1614>1633 |
1656,1614 | + | - | 1614>1656 |
1648,1602 | + | - | 1602>1648 |
1656,1602 | + | - | 1656>1602 |
1633,1602 | + | + | 1602>1633 |
1656,1589 | + | - | 1589>1656 |
1614,1589 | + | - | 1589>1614 |
1656,1648 | + | - | 1633>1648 |
图4-10不同pH段的二维相关同步谱的能量谱,a、b、c、d四个谱图依次为pH7.2-5.0,5.2-4.4,4.6-3.8,3.8-3.0范围二维相关同步能量谱图
图4-11对异步谱中的1653cm-1的异步谱进行提取的图谱,从上到下依次为pH7.2-5.0、5.2-4.4、4.6-3.8、3.8-3.0范围对异步谱中的1653cm-1的异步谱进行提取图谱