峰形咋看都不好，原因这里找一找！

月旭

2019/09/11

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在做样分析过程中，经常会出现色谱峰图异常的现象，比如前沿或者拖尾，这给我们的分析检测造成了很大的困扰，而超载是导致峰形异常的原因之一，接下来首先介绍一下超载：

超载

当供试品进样量和进样体积在安全的范围内，改变进样量和体积会相应地影响到峰高和峰面积，而保留时间、峰宽和分离度的影响并不大，但当进样体积或者质量很大的时候，就会造成超载现象，伴随着峰宽增加、峰型变差和分离度降低。
柱长在50~250mm，内径4~5mm的色谱柱，单个样品的进样质量应该在50μg以内，进样体积小于25 μL。超载分为体积超载和质量超载两种，下面将分别对这两个超载对分离的影响做介绍。
（1）体积超载：下图分别是1mg/mL的连翘苷10、40、60、80、100 μL的色谱图，可以看到10 μL的峰形最好，40 μL已经出现前延，而随着进样体积的增大，会愈发明显。

（2）质量超载：下图是氨基酸及其衍生物的测定，正常质量和超大质量所表现出的峰形。

超载会影响到色谱峰形，当进样体积和质量在合适的范围内，是获得良好峰形的保证，而又有哪些因素可以导致前延和拖尾呢，下面我们接着说。

前延：（拖尾因子Tf<0.95）

1. 溶剂效应的影响
（1）用流动相溶解样品：（姜黄素标准品）

（2）先强溶剂溶解样品，然后用流动相稀释：（石杉碱甲标准品）

2、缓冲作用不合适：（注射用苦参碱）

3、仪器系统不合适：
当月旭超高效色谱柱（Ultimate® XB-C18，4.6×50mm，1.8μm）在常规的液相色谱仪上使用时，由于系统死体积大，会影响到峰形，下图是罗氟斯特项目，可以看到色谱峰都出现了前延的现象。

拖尾：（拖尾因子Tf>1.05）
1. 降低pH，抑制硅羟基的电离

2、增加缓冲盐，加大缓冲作用

3、因为每种缓冲盐的缓冲能力不一样，可以通过更换缓冲盐来调整：

4、屏蔽硅羟基的影响（如加入三乙胺）

在我们进行定性定量的检测分析时，色谱峰形对我们的实验结果有较大影响，因而保证良好的峰形，是我们实验成功的关键，而排查和解决异常峰形问题自然也是我们实验分析的重要技能。