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样品无法达到分离，峰形杂乱求高人解答

ppp211530

2019/09/11

液相色谱（LC）

我做的是制备色谱，多肽的纯化。流动相用的是 A相：0.05TFA/水 B相：0.05TFA/90%乙腈
用的是依利特的制备色谱，100mm的C18柱。后来通过摸索发现是B相出了问题，可是具体到底是什么问题不清楚。
附图：图1是流动相出了问题出来的图图2是换了流动相后出来的图（图2是正常的图，蓝色圈圈内是我需要的样品峰。）后来检测过图1的每个峰，发现没个峰当周都有我需要的样品，样品没达到分离的效果。请求高人解答疑难。

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m3132337

第1楼2019/09/12

应助达人

第二张图看着是正常的，你的样品里应该有跟目标物性质很相似的峰，把梯度调缓一些试试，如果加了柱温，把柱温调低点，再有长柱的话，试一下更长的柱子，或者你把乙腈改成甲醇试试。
这些条件都不可以的话，建议直接用质谱定量。
第一张图出现的情况，推测你是否重复进样了，前一针没有洗脱完全就进了下一针？

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m3132337

第2楼2019/09/12

应助达人

也有可能柱子和系统刚开始没有平衡好而造成
m3132337(m3132337)发表:第二张图看着是正常的，你的样品里应该有跟目标物性质很相似的峰，把梯度调缓一些试试，如果加了柱温，把柱温调低点，再有长柱的话，试一下更长的柱子，或者你把乙腈改成甲醇试试。
这些条件都不可以的话，建议直接用质谱定量。
第一张图出现的情况，推测你是否重复进样了，前一针没有洗脱完全就进了下一针？

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