含蛋白保健品（水溶液）直接进样对色谱柱影响

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2019/11/12

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测试版面

前提：本人检测保健品中的腺苷含量，采用0.01mol/ml磷酸二氢钾水溶液-甲醇（90:10）流动相，25℃柱温，1ml/min流速。该保健品中含蛋白质、皂苷等，样品只经0.45μm滤膜过滤后即进样检测（该样品在进样品中放置过夜后变浑浊，室温约28℃）。色谱柱用的是C18柱，未用保护柱。
问题：如此检测样品，第一根色谱柱，连续使用3天，开头正常，后面腺苷峰形最终变叉峰。第二根色谱柱，断续使用，每次使用约6小时（8针样品左右），此后都梯度慢慢冲洗色谱柱，断续使用几次后均正常。最近一次，第一针只有前6min出峰，第二到四针正常，以后十几个样品均不能正常出峰，或只前几分钟出峰，或出很多杂峰，最后几针进的是对照，没有在相应的保留时间出峰，出现的峰形很差，有变叉峰的趋势。
请高手帮我分析一下，是磷酸盐流动相的问题，还是样品前处理不当导致色谱柱分离不当？含蛋白质、磷酸盐会影响色谱柱分离吗？再这么下去，可没柱子测了，很心痛我的柱子。。。

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第1楼2019/11/12

做这类东西（含蛋白之类），柱子都特别容易报废。

建议
1、先排除是否色谱条件引起的出峰异常（是否耐用性低）
2、检查是否进样前或连续进样前（针对梯度），是否平衡，或流动相比例回到起始状态并平衡5min左右（针对梯度）
3、柱温可以考虑调高一点，现在天气炎热，除非能保证环境温度低于25或柱温箱能降温，不然建议调至40
4、使用预柱，或添加在线过滤器
5、0.45um改用0.22或0.20um微孔滤膜