【资料】动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定 气相色谱-质谱法

6　分析步骤
6.1　试样制备
取有代表性的样品，经绞碎后，保存于-20℃冰箱中，备用。
6.2　试样提取
称取试样5g（精确到0.01g），置于50mL离心管中，加β2-兴奋剂内标工作液（4.17）50μL；加甲醇20mL，10000r/min以上均质60s，加盖，于60℃超声波清洗器中超声20min；取出离心管，冷却后8000r/min离心10min，倾出上清液至分液漏斗中，另取甲醇10mL重复提取一次，合并上清液；加正己烷20mL脱脂一次，分离甲醇相，在60℃下氮气吹至2mL以下；加0.2mol/L盐酸（4.5）3mL，充分混匀后，在9000r/min离心10min，分出上清液，备用。
6.3　试样净化
依次用甲醇5mL、水5mL、30mmoL/L盐酸溶液（4.6）5mL润洗阳离子交换固相萃取柱（4.12）；取6.2上清液过柱，弃去流出液，并依次用水5mL和甲醇5mL淋洗柱子，抽干；用4％氨水/乙酸乙酯溶液（4.11）10mL洗脱，收集洗脱液，经无水硫酸钠（4.7）脱水，50℃氮气吹干；残余物中加乙酸乙酯5mL，置于超声波清洗器中超声5min，5000r/min离心5min，分出上清液至5mL具塞玻璃试管中，50℃氮吹至干，吹干物备用。
6.4　衍生化
吹干物加入甲苯（4.9）100μL和衍生剂（4.10）100μL，加塞后于涡旋混合器充分混匀，在80℃±5℃的烘箱中恒温衍生60min，氮气吹干，加甲苯0.5mL溶解供GC-MS分析。
另取β2-兴奋剂混合标准工作液（4.16）适量，加β2-兴奋剂内标工作液（4.17）50μL，加乙酸乙酯5mL后，氮气吹干，与样品同步进行衍生化。

6.5　仪器测定
6.5.1色谱条件
色谱柱：5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)，或具同等性能的色谱柱；
进样口温度：280℃；
柱温程序：初温120℃，保持3 min，然后以10℃／min升至230℃，保持5min，再以10℃／min升至280℃保持3min；
载气：高纯氦气（99.999%）；
流速：1.0mL/min，不分流进样；
进样量：2.0μL。
6.5.2质谱条件
EI源：源温230℃；
电子能量：70eV；
接口温度：280℃；
电子倍增器电压：高于调谐电压200V；
质量扫描范围：30～550U；
溶剂延迟：10min ；
选择离子监测方式（SIM）。
监测离子（m/z）：特布他林86、356*、426；克伦特罗86*、262、243；沙丁胺醇369*、440、207；莱克多巴胺179、250*、502；D9-克伦特罗95*、262；D3-沙丁胺醇372*、443；其中带*离子为定量离子，分三段进行采集，特布他林、克伦特罗、D9-克伦特罗为第Ⅰ阶段，沙丁胺醇、D3-沙丁胺醇为第Ⅱ阶段莱克多巴胺第Ⅲ阶段，详见表1。
表1 4种β2-兴奋剂和2种内标物的保留时间和质谱条件
药物名称    采集阶段    选择离子（m/z）    定量离子（m/z）
特布他林    Ⅰ    356，86，426    356
克伦特罗    Ⅰ    86, 243, 262    86
D9-克伦特罗    Ⅰ    95，262    95
沙丁胺醇    Ⅱ    369，207，440    369
D3-沙丁胺醇    Ⅱ    372，443    372
莱克多巴胺    Ⅲ    250, 179, 502    250
6.5.3 气相色谱-质谱测定
6.5.3.1 定性方法
在相同试验条件下，样品中待测物与同时检测的标准物质的保留时间之差在±2s之内，并且所选择的离子相对丰度比符合表2要求，可判定为样品中存在该药物残留。
表2 试样离子丰度比与标准物质离子丰度比的允许偏差范围
占基峰相对丰度（％）    最大允许偏差（％）
＞50    ±10
＞20～50    ±15
＞10～20    ±20
≤10    ±50
6.5.3.2 定量方法
以峰面积按内标法进行单点或多点校准定量，标准工作液和样品液中药物响应值均应在仪器检测线性范围内。
以D9-克伦特罗（m/z 95）作为计算克伦特罗（m/z 86）和莱克多巴胺（m/z 250）浓度的内标物，以D3-沙丁胺醇（m/z 372）作为计算特布他林（m/z 356）和沙丁胺醇（m/z 369）浓度的内标物。
7　结果计算
按内标法单点或多点校准计算试样中4种β2-兴奋剂的含量。
试样中4种β2-兴奋剂的含量按下式计算：
A
X＝ ×D
M
式中：X——试样中β2-兴奋剂各组分的含量，μg/kg
A——试样色谱峰对应的β2-兴奋剂各组分的质量，ng
M——试样质量，g
D——稀释倍数
计算结果保留3位有效数字。
8　精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值之比应不大于20％。
9　回收率
本方法回收率在60％～130％之间。

我刚起草的浙江省地方标准，供大家参考。

可以用试剂盒

多谢楼主！
辛苦了

前处理太复杂了，不过还是要谢谢你

方法不错

不错,比较详细

我按照这个标准做了，好像回收不是很好，还请楼主赐教。。。
楼主，怎么联系你呢？