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这种方法中稀释倍数（D）和样品浓度（C）是多少？

tanglong119

2020/01/19

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂（DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
请教各位大神，这种方法中稀释倍数（D）和样品浓度（C）是多少？怎么得出的？万分感谢！

wangjun53022263

第1楼2020/01/19

稀释倍数D是自己定的，根据你的样品中巯基的含量不同合适的稀释倍数不同。就是3mg/ml的样品稀释D倍后，反应后测定得到的吸光值比较合适（一般0.2-0.8）。

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