色谱柱的安装有什么技巧吗 ?只要保证不漏就行了吗 ?还有所谓的死体积怎么测定呢 ?

色谱柱安装技巧不多，只要接头和柱头匹配，确实拧紧不漏就可以了，
但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。 所谓死体积就是完全不保留的物质出
峰时从进样到流过色谱柱的总体积，一般用极性非常强的尿嘧啶的出峰来测定。
死体积包括柱体积 ( 色谱柱内溶剂能占据的空腔体积 ) 和柱外体积两部分。 你从厂
商这里买到色谱柱， 柱体积已经是固定了， 你能尽量避免减少的是柱外体积。 进
样器内死体积、 毛细管长度、 毛细管和色谱柱连接紧凑与否， 保护柱或在线滤器
产生的死体积大小，都对这个有影响。样品在柱内，除扩散外，还有和填料作用
引起的组分分离 ; 但样品在柱外，那就只有扩散这个使柱效下降的因素了。
所以，要取得好的分离效率，柱外体积应该是越小越好。峰有时候前延，有
时候拖尾， 一般不是色谱柱的问题， 应该是样品和色谱柱填料的作用问题， 可以
说如果色谱柱类型选择没问题， 关键就是色谱条件的选择。 包括进样量、 样品溶
剂、流动相组成 ( 包括添加剂 ) 、流动相 pH以及柱温，都对峰形有影响。另外测
定分子量较大的多肽， 用样品老化平衡色谱柱很重要， 分子量越大的物质， 需要
平衡时间越长。 如果柱子没平衡好， 峰形也可能会不正常。 所以最好把你具体的
测定条件也列一下，也便于有针对性的分析原因。