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请问方法有什么可能存在的问题吗？

tanglong119

2020/04/07

参考的方法如下：
取1mL在2.3.3.6中配制的豆浆溶液加入2.0mL的缓冲液1（每升溶液含10.4gTris，6.9g甘氨酸，1.2g EDTA，pH=8.0）或缓冲液2（每升溶液含10.4gTris，6.9g甘氨酸，1.2g EDTA，480g尿素，pH=8.0）后再加入0.02mL的Ellman试剂（0.2gDTNB溶于50ml缓冲溶液1中），25℃下保温5min，采用可见分光光度计，在412nm处测定吸光值。实验以不加豆浆，而加Ellman试剂为空白。巯基含量的测定= 73.53*A412*D/C , 式中A412为有DTNB存在时豆浆的吸光值减去无DTNB存在时豆浆的吸光值，D为稀释倍数，C为豆浆固形物含量
这是一篇文献中测定巯基的方法，我也是按这个过程操作的，在计算过程中A412（有DTNB存在时豆浆的吸光值减去无DTNB存在时豆浆的吸光值）出现了负值，不知道有么有人知道可能是什么问题造成的呢，该怎样处理这个问题，而且已经重复做了试验，确定不是操作失误，会出现三四个负值，请问方法有什么可能存在的问题吗？求大神解答啊

feifan1028

第1楼2020/04/07

建议做个波长扫描，看一下有DTNB存在时豆浆的最大吸收波长是不是412nm，和无DTNB存在时豆浆在412nm处的吸光度

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