【分享】弱弱地上图

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物镜 20x Pinhole值0.27Airy, 不知道激光强度和gain以及offset值大概取多少？红、蓝控制的如何？

噪声控制的可以，不知道实体图有没有经过图像处理（过滤、guass模糊，傅立叶转换之类的）

下面是我用50X物镜， Pinhole值1.60Airy，切片20层做的，激光强度50%，gain值100， offset值0.1

附带二维和三维轮廓分析

注：图片分辨率较大（1024*1024），需放大看。

实体图，未经任何处理。

原先认为激光强度和gain以及offset值不同样品反射率不同, 写出来意义不大, Gain应该在200~300左右, Offset为0. Zeiss的红蓝控制在Leica表示为蓝绿, 在图中有反映.实体图是Topo的实体, 未想到直接显示3D, 未经其它处理,如经图像处理的话就不能反映粗糙度了? 以后有机会在上图, 可惜金属材料的样品没有, 这只是样品的框架.
如果Pinhole为1.6Airy的话是否层面太厚了, 按通常50X物镜NA约0.8左右, 如果1.6Airy的话层面解析可能都要有1um左右啦.

我以前pinhole值一直设在0.3左右，但是红蓝调节时蓝色的残留老是去不掉，所以你看我的offset总是调到最大0.1。这个是不是我的设备参数没有调好？
另外我发现在比较小的pinhole下，如果我想得到比较高的亮度，只能跳激光强度和gain值，但是很容易出现红色，如果我调到红色基本上没有的时候，切片的图像大部分都很暗。昨天我试着在50X物镜下调整激光强度，gain值以及offset到基本上没有红、蓝出现，然后调大pinhole值，这样整个切片亮度就上来了，而且不会出现红色。

谢谢你的图片呀

Pinhole 小了, Z轴层面分辨率提高, 得到的结果是不在焦平面的影像将不在象平面的针孔后出现, 表现出来的不就是黑吗? 个人见解

好东东，谢谢了。

按道理是这样的，但是一直有一个问题，我举个例子：
以滑痕为例，假如整个划痕波峰到波谷的扫描深度为10微米，我做切片时，应该在5微米中间处进行红蓝调节，当我调好红蓝时移到波峰处，会显示很多红色（即过亮），而移到波谷处是会显示很多蓝色（为过暗）。所以当我尽量将波峰处的红色调没时，波谷处已经暗的不行了。
这个让我很头疼。

无论波峰还是波谷, 从波峰到波谷总有一垂直位置是在共焦面上, 若是理想划痕,扫描得到的自上而下为:一黑调带在聚焦面-->黑色条带变窄同时聚焦面离焦变黑, 在原黑带边缘出现两亮线-->亮线靠拢中-->两线合为一线(到划痕底)-->线变暗(离焦). 是这样吗?