你好，在反相柱中检测酸性物质时，pH调制酸性，是抑制样品解离吧，那这样的话，样品在固定相中是长保留还是低保留啊？
在样品为碱性情况下PKa为8，调制pH>10也是抑制样品解离吧，此时样品在固定相中是长保留还是低保留啊？
yjz1203(yjz1203) 发表:为离解型化合物开发可行的（rugged）HPLC方法的策略
J.J.Kirkland
*使用了有机改性剂的方法为不理想但可行的方法。
碱性和酸性的化合物
预先分离
对低pH敏感的碱性化合物跳到步骤5
步骤1：使用C18、C8柱，使用20-50mM磷酸盐缓冲体系（pH=<3），调节乙腈百分比使得k为0.5-20，使用1.0ml/min的流速，如果峰扩散——跳到2
如果拖尾——步骤1a
步骤1a 增加20mM TEA或它的乙酸盐
弱保留碱性化合物——跳到1b
步骤1b 用含有机改性剂的甲醇——加己烷磺酸，磷酸盐缓冲体系（pH=<3），如果峰扩散再跳到5
步骤2 改变柱温，如果峰扩散 ——跳到2a，3
步骤2a
以～5%（v/v）的幅度增加或降低乙腈百分比，如果峰扩散再跳到3
步骤3 流动相改用甲醇或四氢呋喃做有机相，保持k为0.5-20，如果峰扩散——跳到3a，4
步骤3a 改变柱温，如果峰扩散再跳到4
步骤4 改变键合相，用腈基柱、苯基柱，重复步骤1、2、2a、3，和3a；如果峰扩散——跳到5
步骤5 使用封端的sol-gel硅胶C18、C8柱，优化流动相：20-50mM有机缓冲体系（pH4-8），和20mM TEA，设置柱温=<40摄氏度，如果峰扩散——6；5a；5b
步骤5a 重复2,2a,3,4；如果峰扩散——6
步骤5b 对酸性物质，用含有机改性剂的甲醇——加TBA的磷酸盐，磷酸盐缓冲体系（pH=<3），调节甲醇比例使k为0.5-20，如果峰扩散——6
步骤6 在步骤5的基础上，加入10-50mM氨基乙酸或硼酸缓冲（pH9-10），调节有机相比例使k为0.5-20，如果峰扩散——6a，7
步骤6a 重复2，3；如果峰扩散——7
步骤7 用其它HPLC方法
译者注：TEA(triethylamine)，三乙胺。
TBA(tetrabutylammonium)，四丁基铵。
Sol-gel，一种硅胶类型，纯度高，耐碱。
封端：用小分子硅烷化试剂对填料进行二次键合，减少硅醇基，提高覆盖率，从而减少碱性物质拖尾。
本文翻译自：38 LC&GC Asia Pacific VOLUME1 NUMBER2 June 1999,Practical Method Development Strategy
for Reversed HPLC of Ionizable Compounds
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