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液相色谱柱的使用误区5

lijing320323

2021/09/26

液相色谱（LC）

误区：不可以将HPLC色谱柱反接以便于冲洗掉其中的颗粒物?

实际上HPLC色谱柱的填装压力比最大使用压力高很多（通常会高2倍）。如果装柱时使用了恰当的匀浆剂，并且分配一定的时间使柱床稳定，一支填装良好的色谱柱是完全可以双向使用的。??

液相色谱柱上基本都有→标志，表示流动相的流动方向，有的在色谱柱上印有“Nerver Lot Flow in the Opposite Direction”字样，翻译成“决不能反冲”的意思，色谱柱可以反冲吗、色谱柱能不能反冲的问题争议很大，但在我们工作中，用色谱柱反冲技术修复色谱柱可以收到柱效提高、柱效恢复的效果。

一、分析氨基酸的离子交换柱，使用一段时间反柱效明显下降，用NaOH活化，达不到要求，但用NaOH反冲活化可迅速恢复柱效。??

二、色谱柱使用一段时间后柱效下降，此时可拆下柱入口端螺帽，去掉1-2mm被污染填料，再用相同填料填满，然后用流动相反冲一下，可使柱效恢复，因反冲可以改善柱头死空间。??

三、因反冲可把沉积在过渡板上的细微颗粒冲走，有时也可用反冲技术使柱压降低。??

反向使用色谱柱有一个例外，就是生产商在色谱柱的进样端使用了孔径更大筛板的情况，反向使用可能会将填料从柱床冲出。如果制造商在柱的入口处使用的是高孔隙率的玻璃料，那么将柱反冲的话，可能会将柱填料从填充床上冲洗掉。??

色谱柱在工厂填装时，出口端的筛板孔径必须比色谱柱中最小颗粒的粒径还要小。譬如，色谱填料平均粒径是5μm，粒径分布范围是3-7μm，出口端筛板孔径必须小于3μm，使填料没有可能从柱床跑到色谱柱筛板外面。??

大多数生产厂家选择的筛板孔径是2μm。至于某些厂家两端的柱筛板孔径不一样，一般是进样端大些，出样端小些。因此，一些制造商会在柱子标签处放置一个箭头指示，表明必须仅在一个方向上使用。可以肯定有这种可能性，所以一个色谱工作者应该好好阅读色谱柱手册或说明书，或与制造商确定这根色谱柱是否可以反冲。??

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