仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
1
3
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
色谱
>
液相色谱(LC)
>
帖子详情
柱后衍生(液相)
遗忘曲线
2021/09/28
私聊
液相色谱(LC)
通过柱后衍生来提高方法的特异性和检测限,我应该怎么做呢?
这需要好多事情,第一,你需要找到和你目标化合物快速反应的物质,为了和
液相
方法兼容,你如果想要一个好的结果,那反应时间要小于5min,甚至要小于2min,第二,反应需要和
液相
流动相兼容,特别是如果你为了分离而使用时,反应需要和水介质兼容,这个在实际例子中不常用,第三,反应产物需要在通用的
液相
检测器上面很容易检测出,为了获得低的检测限,反应产物需要在没有其他基质干扰情况下检测出,这种条件下的样品的吸收检测一般在可见波长或者荧光检测,第四,这种检测要对你目标物质有专属性,例如,胺的衍生可以提高世界上所有胺的检测,但是你只需检测出你分析的物质里面所含的胺,这个是你解决的问题最好的方式,
确实,这需要好多的要求,我想知道里面的一点点,为什么完成需要如此短的反应时间?
刚刚给你了好几个知识点,这也以为着里面有好多灵活可调节的地方,让我们思考一下,哪个是必须的,
液相
分离需要不断的流动相,不断的流动相会在柱后和反应试剂混合,而这个混合物需要储存在某个地方一直到反应到我们想要的物质,这个方式通常是在流动中进行,流动相的一般流速是1 ml/min,你的反应试剂也是同样的流速,如果你反应5min,你需要在你的检测器和柱子中间储存10ml混合物,标准9/1000毛细管大约是250米,即使你使用的毛细管是0.5mm,你依然需要50m的管路,这个是非常大的管路,你同时也需要担心管路的扩增,如果你使用run-of-the-mill管路,那管路的扩展需要毫升或者更多,在4.6 mm × 150 mm的色谱柱上,保留系数为2的峰宽仅为0.2 ml,色谱柱中分辨良好的峰会相互稀释和丢失。因此,在我们的例子中,柱外带扩展将破坏你在你的高性能高效
液相色谱
柱中实现的分离。现在你明白为什么要缩短反应时间了吧
好的,我明白了,你刚刚说使用一个普通的油管,这个是什么?我有其他的选项吗?
我指的是一根直的管子或简单的线圈,如果你使用特氟龙的管路,你可以做一些事情来防止带扩散。你可以“编织”它。
什么?编织一节特氟龙管路?
你没有听错,这是指一种将受控变形模式应用到油管(1.2.3),这种控制模式在油管内产生二次流动,提供径向混合。二次流极大地减小了油管内的带状扩张。在精心设计的几何变形油管中,HETP可能比直管小100倍甚至1000倍。这种效果在压力下会有一点损失,这都不是事了。
关于编织技术的重要部分是流动路径(1)的变形模式。一个人想要实现一个恒定的转移的离心力的方向那么就需要在作用在油管中的流动上,并创建径向混合。就像三维过山车一样。最好的配置有0.5cm左右的HETP,从而在50m的油管中产生约10000个板。这种高性能的结构使柱后衍生化与HPLC分离兼容,并很大程度上消除了上述的带扩散问题。
特氟龙因为其他的原因也是一个很好的选择,实际上它可以直接接触你可以想到的所有反应介质和流动相,并且它还有好的热稳定性,为了加速反应,你也可以提高工作温度,其他一些你想使用的塑料管路在这种情况下会变软,钢或者铜的管路也是你柱后衍生的另外的选择,它们也可以直接接触你衍生反应过程中的中间物质,然而,把他们编织成最佳形式可不是简单的事情,。与特氟龙管相比,你将会降低带扩展性能。
让我们讨论一下反应条件,我应该考虑哪些呢?
首先,所有的反应必须是你满足你的需要,它必须有足够的特异性和检测灵敏度,大量的反应早已开发完成了,这本书里面已经有详细的介绍了(Handbook of Derivatization Reactions for HPLC),这个会帮助你学习到一些你需要的基本知识,你需要探索感兴趣的分析对象和它们的矩阵之间的差异,你的反应和检测方案就越具体。你能忍受的基质干扰越多同时,感兴趣的化合物的反应应该与没有发生反应的背景有显著不同。这就是为什么大多数已发表的反应方案会导致颜色或荧光的形成
下一步,你想要缩短反应时间,慢的反应和缩短反应时间两个是相互矛盾的,对于大多数实际的例子,反应时间都不会超过5min,你可以通过提高温度或者增加反应试剂的浓度来加速大部分反应,而反应不需要到达终点,由于反应过程的综合影响和管路的扩展,你需要在反应终点前获得检测器的最大反应,然而,你需要找到试剂浓度或温度的轻微的变化不会影响响应的条件。在反应模式中找到一个平台期通常并不困难,通常我们可以计算得到,但对于大多数实际目的来说,一些实验将提供正确的答案。
相关话题
1
柱子可以用百分之百的水冲洗吗
2
液相????
3
高效液相色谱仪
4
液相色谱紫外检测器氘灯使用注意
5
新的色谱柱柱活化冲洗技巧1
+关注
私聊
123
第1楼
2021/09/29
应助达人
谢谢分享!
0
发表回复
近期热榜
迎国庆送壕礼!十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆!第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
热门活动
【售后专场--招聘会】
第三届微课大赛投票进行中ing
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【求助】上海伍丰的LC-100紫外液相色谱仪能检测的具体物质?
2009/10/14
【求助】检测器也会产生压力吗?我这个正常吗?
2010/09/26
液相的相对响应值如何计算
已应助
2017/12/07
关于亮蓝出两个峰的解决办法
分享
2012/05/25
大家用废掉的色谱柱如何处理?
讨论
2014/05/21
HPLC基线抬升
讨论
2011/12/31
求助:电化学检测器
2005/12/08
关于检测器的衰减倍数
求助
2014/09/04
岛津液相色谱再解析软件错误提示
求助
2024/10/01
高效液相色谱基础篇|关于反相色谱柱维护保养及注意事项小知识
分享
2024/09/30
高效液相色谱基础篇|关于反相色谱柱使用的小知识
分享
2024/09/30
高效液相色谱基础篇|关于色谱柱平衡的小知识
分享
2024/09/30
高效液相色谱基础篇|关于接头的小知识
分享
2024/09/30
高效液相色谱基础篇|关于管线使用的小知识
分享
2024/09/30
高效液相色谱基础篇|关于系统适用性标准考量的小知识
分享
2024/09/30
全新安捷伦液相1290急出
原创
2024/09/30
用实力证明 - 技术人员能力好坏“我说行就行”的时代过去了?
第十七届原创
2024/10/02
同一个部门的人进门还让登记,宝宝很生气!
第十七届原创
2024/10/03
要想新员工学的快,培训技巧很重要!
第十七届原创
2024/10/04
【仪器心得】TDU2第二套热脱附使用心得
第十七届原创
2024/10/02
出峰时间和分子离子峰一样,二级质谱图不一样是同种物质吗
已应助
2024/09/28
玻璃器皿的质保期
已应助
2024/09/28
关于CNAS-G001:2024里的条款理解?
已应助
2024/09/30
岛津2014色谱TCD检测标气中的氧气和氮气,氧气不出峰怎么处理
已应助
2024/09/29
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)诚聘资深售后支持工程师 - 色谱,坐标上海市,你准备好了吗?
原创
2021/09/28
苏丹红测定问题
已应助
2021/09/28
做SPME色谱柱过载怎么解决
已应助
2021/09/28
安捷伦7890B气相色谱仪出峰异常
已应助
2021/09/28
关于菌落总数的测定实验的结果计数问题
讨论
2021/09/28
SIM设置的问题
已应助
2021/09/28
GB/T 3324-2017 木家具通用技术条件里面有一条“活动部件间距≥25mm“是为什么?
讨论
2021/09/28
求推荐色谱书籍
已应助
2021/09/28
品牌合作伙伴
丹纳赫苏州基地 打工人的梦想
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...