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柱后衍生(液相)

  • 遗忘曲线
    2021/09/28
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 通过柱后衍生来提高方法的特异性和检测限,我应该怎么做呢?

    这需要好多事情,第一,你需要找到和你目标化合物快速反应的物质,为了和液相方法兼容,你如果想要一个好的结果,那反应时间要小于5min,甚至要小于2min,第二,反应需要和液相流动相兼容,特别是如果你为了分离而使用时,反应需要和水介质兼容,这个在实际例子中不常用,第三,反应产物需要在通用的液相检测器上面很容易检测出,为了获得低的检测限,反应产物需要在没有其他基质干扰情况下检测出,这种条件下的样品的吸收检测一般在可见波长或者荧光检测,第四,这种检测要对你目标物质有专属性,例如,胺的衍生可以提高世界上所有胺的检测,但是你只需检测出你分析的物质里面所含的胺,这个是你解决的问题最好的方式,


    确实,这需要好多的要求,我想知道里面的一点点,为什么完成需要如此短的反应时间?


    刚刚给你了好几个知识点,这也以为着里面有好多灵活可调节的地方,让我们思考一下,哪个是必须的,液相分离需要不断的流动相,不断的流动相会在柱后和反应试剂混合,而这个混合物需要储存在某个地方一直到反应到我们想要的物质,这个方式通常是在流动中进行,流动相的一般流速是1 ml/min,你的反应试剂也是同样的流速,如果你反应5min,你需要在你的检测器和柱子中间储存10ml混合物,标准9/1000毛细管大约是250米,即使你使用的毛细管是0.5mm,你依然需要50m的管路,这个是非常大的管路,你同时也需要担心管路的扩增,如果你使用run-of-the-mill管路,那管路的扩展需要毫升或者更多,在4.6 mm × 150 mm的色谱柱上,保留系数为2的峰宽仅为0.2 ml,色谱柱中分辨良好的峰会相互稀释和丢失。因此,在我们的例子中,柱外带扩展将破坏你在你的高性能高效液相色谱柱中实现的分离。现在你明白为什么要缩短反应时间了吧


    好的,我明白了,你刚刚说使用一个普通的油管,这个是什么?我有其他的选项吗?


    我指的是一根直的管子或简单的线圈,如果你使用特氟龙的管路,你可以做一些事情来防止带扩散。你可以“编织”它。


    什么?编织一节特氟龙管路?


    你没有听错,这是指一种将受控变形模式应用到油管(1.2.3),这种控制模式在油管内产生二次流动,提供径向混合。二次流极大地减小了油管内的带状扩张。在精心设计的几何变形油管中,HETP可能比直管小100倍甚至1000倍。这种效果在压力下会有一点损失,这都不是事了。


    关于编织技术的重要部分是流动路径(1)的变形模式。一个人想要实现一个恒定的转移的离心力的方向那么就需要在作用在油管中的流动上,并创建径向混合。就像三维过山车一样。最好的配置有0.5cm左右的HETP,从而在50m的油管中产生约10000个板。这种高性能的结构使柱后衍生化与HPLC分离兼容,并很大程度上消除了上述的带扩散问题。


    特氟龙因为其他的原因也是一个很好的选择,实际上它可以直接接触你可以想到的所有反应介质和流动相,并且它还有好的热稳定性,为了加速反应,你也可以提高工作温度,其他一些你想使用的塑料管路在这种情况下会变软,钢或者铜的管路也是你柱后衍生的另外的选择,它们也可以直接接触你衍生反应过程中的中间物质,然而,把他们编织成最佳形式可不是简单的事情,。与特氟龙管相比,你将会降低带扩展性能。


    让我们讨论一下反应条件,我应该考虑哪些呢?


    首先,所有的反应必须是你满足你的需要,它必须有足够的特异性和检测灵敏度,大量的反应早已开发完成了,这本书里面已经有详细的介绍了(Handbook of Derivatization Reactions for HPLC),这个会帮助你学习到一些你需要的基本知识,你需要探索感兴趣的分析对象和它们的矩阵之间的差异,你的反应和检测方案就越具体。你能忍受的基质干扰越多同时,感兴趣的化合物的反应应该与没有发生反应的背景有显著不同。这就是为什么大多数已发表的反应方案会导致颜色或荧光的形成


    下一步,你想要缩短反应时间,慢的反应和缩短反应时间两个是相互矛盾的,对于大多数实际的例子,反应时间都不会超过5min,你可以通过提高温度或者增加反应试剂的浓度来加速大部分反应,而反应不需要到达终点,由于反应过程的综合影响和管路的扩展,你需要在反应终点前获得检测器的最大反应,然而,你需要找到试剂浓度或温度的轻微的变化不会影响响应的条件。在反应模式中找到一个平台期通常并不困难,通常我们可以计算得到,但对于大多数实际目的来说,一些实验将提供正确的答案。



  • }

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  • 123

    第1楼2021/09/29

    应助达人

    谢谢分享!

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