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如何用液质联用对未知物进行定性分析？

  • 通标小菜鸟
    2022/10/08
    菜鸟分析队
    • 私聊

液质联用（LCMS）

3票
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  • 如何用液质联用对未知物进行定性分析？

    通标小菜鸟



    1、 准备工作

    1、 核对样品名称、编号。

    2、 询问样品提供人，了解样品来源、合成路线、光谱及波谱数据，理化性质（熔点、沸点、溶解性等），查阅相关文献。

    3、 了解可能含有的杂质，样品大致含量，样品保存状态、温敏、光敏等。

    4、 大致摸一下LC条件，确定流动相以及缓冲体系，确保符合MS要求。

    5、 色谱柱的准备，冲洗干净并且进行活化处理。

    6、 样品溶剂不合适需要进行置换，与流动相保持一致，固体样品可加入一滴DMSO后再加甲醇或者乙腈进行稀释。

    2、 色谱柱选择

    1、 选择长柱来提高分离度， 不同内径推荐流速4.6mm（流速1.0ml/min）、3mm（流速500μL/min）、2.1mm（流速200μL/min）、1mm（流速50μL/min）。

    2、 特殊的化合物不知道如何选择色谱柱，可以直接询问厂家，看是否有专用柱进行分离。

    3、 LC条件的优化

    1、 设置梯度淋洗，可以确保快速分离，同时也能获得更好的峰型，缩短分析时间，提高实验效率。

    2、 分析多肽类化合物一般采用梯度洗脱，采用梯度洗脱获得的信号要比等度洗脱来的强。

    4、 确定离子化方式

    1、 根据样品性质来确定离子化方式

    ESI源（电喷雾电离源）：适用于离子型和极性化合物，特别是热不稳定极性化合物、小分子药物、各种体液代谢产物、农药、化工产品中间体杂质鉴定，大分子蛋白质和肽类的分子量，氨基酸测序等。但不适合苯等极端非极性化合物。

    APCI源（大气压化学电离源）：适用于弱极性、中等极性小分子，如脂肪酸、邻苯二甲酸、脲等物质，不适合非挥发性、热稳定性差的物质。

    2、 正模式和负模式的选择

    正模式：适用于碱性化合物，如含有鞭氨酸、精氨酸和组氨酸的肽类，可用乙酸（pH为3~4）或甲酸（pH为2~3）对样品加以酸化。

    负模式：适用于酸性化合物，如含有谷氨酸、天冬氨酸的肽类可用氨水或三乙胺进行碱化。

    如果遇到未知性质的化合物，可用正负离子模式都做，然后选择灵敏度高的方式进行分析。

    5、 初步定性-确定化合物的分子量

    1、 纯样品可以使用针泵直接进样，设置低的DP值，通过改变DP值观察离子增减，M+1、M+18、M+23、M+39、2M+1等等，初步判断分子量。

    2、 采集一段时间溶解样品的溶剂本底信息，DP同实际样品相同，以便扣除本底干扰，可使用高、低DP电压各做一次，如20V/80V等。

    3、 当样品溶液含有强离子抑制物质时，直接进样可能看不到化合物分子离子峰（离子抑制），此时可以经色谱柱分离或者对样品用溶剂进行稀释。
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  • Insm_f1be3617

    第1楼2022/10/31

    不管是已知物质的分析也好，还是未知物分析也好，其实做的多了，都会总结出那么一些套路，之后的工作按照套路走就会游刃有余很多

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  • 通标小菜鸟

    第2楼2022/11/03

    应助达人

    是这样的，不管做什么做的多了积累了经验就会有自己的见解和窍门

    Insm_f1be3617(Insm_f1be3617) 发表:不管是已知物质的分析也好，还是未知物分析也好，其实做的多了，都会总结出那么一些套路，之后的工作按照套路走就会游刃有余很多

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  • memory光阴

    第3楼2022/11/03

    应助达人

    感谢老师分享，了解了如何对未知物进行分析

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  • 通标小菜鸟

    第4楼2022/11/05

    应助达人

    感谢回复和评论

    memory光阴(Ins_91d3b22d) 发表:感谢老师分享，了解了如何对未知物进行分析

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  • 马克西姆

    第5楼2022/11/07

    请教：纯样品为什么要设置低DP进样啊？

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  • 马克西姆

    第6楼2022/11/07

    哦，去簇电压，也就是多数质谱上的锥孔电压。
    主要是影响离子进入质谱的速度。锥孔电压高，离子速度快，离子损失小，检测灵敏度高。反之则相反。过高的锥孔电压会增加离子间的碰撞，引起源内裂解，产生碎片离子。通常再25－70V之间优化。低分子量选用低电压，高分子量选用高电压。

    马克西姆(v2795912) 发表:请教：纯样品为什么要设置低DP进样啊？

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  • ie4680180

    第7楼2022/11/25

    应助达人

    很实用，如果大师能举个例子来说明就更好了。

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  • 通标小菜鸟

    第8楼2022/11/25

    应助达人

    等有合适的案例，整理好了发上来

    ie4680180(ie4680180) 发表:很实用，如果大师能举个例子来说明就更好了。

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  • feirenlei911

    第10楼2023/03/14

    应助达人

    保留时间，碎片离子，离子之间的丰度比定性

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