hilic色谱柱如何使用

高比例水相会大大缩短HILIC柱的寿命 切不可像反向C18那样冲洗
我们是使用后用60：40 乙腈：水冲洗一段时间 然后切换至95：5 乙腈：水冲洗置换并保存

应助达人

a)HILIC色谱柱的平衡使用50倍柱体积的50/50的乙腈/水相缓冲溶液（缓冲液的最终浓度为10mM）平衡新色谱柱在开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱进行梯度分析时，进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱说
明：色谱柱平衡不充分将导致保留时间漂移
b)HILIC流动相需要注意的问题流动相中总是至少保持5%的极性溶剂
(如5%水相缓冲液，5%甲醇或3%甲醇/2%水相缓冲液等），这保证HILIC硅胶填料始终被水浸润在流动相或梯度中至少保持有机溶剂（如乙腈）的比例不低于40%不要使用磷酸盐缓冲溶液体系，因为磷酸盐缓冲液在HILIC色谱模式下会析出；使用磷酸则没有问题缓冲系统如甲酸铵或乙酸铵水溶液比甲酸或乙酸的水溶液
有重现性更好的结果。如果不能使用缓冲
液而一定要使用流动相添加剂如甲酸，最
好使用0.2%的浓度而非0.1%v.
c).为得到最好的峰形，在流动相或梯度中总是保持缓冲系统的浓度为10mMHILIC进样溶
剂需要注意的问题如果可能，尽量用
100%乙腈溶解样品进样。避免使用水配
制样品溶液，请选择较弱的HILIC溶剂如
乙腈、甲醇、异丙醇等配制样品溶液。最
常用的进样溶剂为75/25乙腈/甲醇，这个
体系充分平衡了样品的溶解度和峰形两个
因素。不要用水或DMSO做进样溶剂，它
们将导致峰形变得很差使用反相SPE技术
将水或DMSO置换成乙腈再进样。

可以看下说明书

请问在流动相或梯度中总是保持缓冲体系的浓度是10mM是什么意思，如果我要用乙酸铵，然后我的流动相就是10mM乙酸铵水溶液和有机相吗？

意思是保证流动相里时刻都有10mM的乙酸铵存在
比如你是等度洗脱 那么 95：5 乙腈：乙酸铵水溶液 这时你配的乙酸铵水溶液里应该含有乙酸铵浓度为200mM
这样5×200/（95+5）=10了呀

那么梯度洗脱时候就同样 如果你用的是四元泵 那就保证一路提供10mM的乙酸铵 另选两路提供乙腈与水进行梯度变化

如果是连接质谱的二元泵 类似下图这样设置就没问题了 时刻流动相中都是有10mM乙酸铵存在的 可以保证比较好的稳定性和重复性

当然了 这个10mM我的理解也就是个建议值 最终还是要依据你具体化合物的分离情况 如果是MS/MS检测结合质谱参数决定最终流动相的组成
需要特别注意的还有就是关注你所用HILIC柱的pH值的耐受范围 注意调节流动相的pH值 使之在允许区间内

冰箱冻梨(Insp_5ed917dd) 发表:意思是保证流动相里时刻都有10mM的乙酸铵存在
比如你是等度洗脱 那么 95：5 乙腈：乙酸铵水溶液 这时你配的乙酸铵水溶液里应该含有乙酸铵浓度为200mM
这样5×200/（95+5）=10了呀

那么梯度洗脱时候就同样 如果你用的是四元泵 那就保证一路提供10mM的乙酸铵 另选两路提供乙腈与水进行梯度变化

如果是连接质谱的二元泵 类似下图这样设置就没问题了 时刻流动相中都是有10mM乙酸铵存在的 可以保证比较好的稳定性和重复性

应助达人

凡事使用过缓冲盐的柱子，实验结束必须冲洗。可由实验最后比例将含盐流动相换成水，梯度至水到90%，冲洗一段时间，再梯度到90%有机相，保存柱子。

应助达人

Hillic柱一般不用梯度，有机相不少于40%

您好，我也是用hilic色谱柱，如果体外方法等度洗脱比较稳定，加基质后出峰时间变化不大 ，但响应较低，还需要加梯度洗脱基质里的杂质吗？