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毛细管电泳无样品峰怎么办?

  • Insm_af467669
    2022/11/02
    冲锋队
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 无样品峰出现,首先检查加电是否稳定,目前各大厂商的毛细管电泳仪主要看电流指标。

    1. 如果没有电流

    1.1可能是残留在毛细管内的溶液结晶,导致毛细管堵塞或毛细管断裂,用水冲洗毛细管,并观察是否有水流出,若无水流出需拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂。如果断裂的话,需更换毛细管;若毛细管没有断裂的话,可以用水反向高压冲洗解决此问题。如果仍不能解决,建议更换毛细管。注意缓冲溶液使用时需用 0.45 μm 的过滤膜过滤,将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。

    1.2背景缓冲液浓度太高:背景缓冲液浓度太高引起很大的电流,进而引起电解质沸腾或者释放气体,最终导致短路,需降低缓冲液浓度或者降低电压。

    1.3样品溶剂浓度过高:纯有机溶剂或高离子强度的样品溶剂可能导致样品区域局部加热,导致该区域沸腾或释放气体,进而引起短路。减少进样时间或者用水稀释样品。

    2. 电流波动很大,直至几乎消失,缓冲溶液中有气泡产生或者区带中有样品析出;需将缓冲溶液超声脱气,如果还有此现象发生,则可能是样品区带有析出,可以通过降低样品浓度/延长 Ramp time 来解决这一问题;对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品,则需要在缓冲溶液中加入添加剂来解决此类问题。

    3. 电流初始值较小,后逐渐增大,可能是样品进样量过大,需减少进样量,通常进样参数设置在 0.5 psi 5 sec 左右。

    如果电流正常,需要从以下方面找原因。

    4. 检查毛细管窗口,检查毛细管窗口,如果窗口位置有残留的灰烬,用沾有乙醇的纸巾轻轻擦拭干净。如果窗口位置不正,将窗口调整到正确位置。

    5. 排查样品问题,微量样品瓶中可能困住一些小气泡,进样过程中导致气泡进入到毛细管内。用样品溶液重新装微量样品瓶,离心去除气泡;待测样品溶解度太低,如果在背景电解质中样品不溶,可能在毛细管内产生沉淀,选择其他可以充分溶解待测样品的背景电解质。样品浓度过低,使用高浓度样品测试。分离极性错误,对于蛋白样品,请注意蛋白在分离条件下其 PI 及所带电荷;对于核酸样品,通常条件下会带负电荷;样品在毛细管内壁吸附,对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离,或采用极端 pH 条件或动态涂层防止样品吸附。

    6. 检测波长,检测波长设置不正确,请确认被分析物的特征吸收,检查方法中的检测波长设置。

    7. 光学检测器或光纤损坏,进行标准样品的测试,如果没有正确的结果出现,则有可能存在硬件问题,请联系工程师。

    8. 分析时间太短,延长分析时间或者增大电压,重新分析。

    9. 氘灯燃尽,能量低,查看氘灯的使用时间,判断灯的运行状态是否正常。

    10. 样品瓶装错样品或者位置放错

    11. 电压方向,电压方向加反,将会导致样品离子移动方向相反,检查方法和仪器设置。

    12. 进样,进样失败,主要由没有气压引起,或者忘记加样品盖导致进样失败;检查气压是否正常,样品瓶盖是否干净或变形。进样时间太长,样品通常会溶解在水中或可能还有一些有机溶剂,因此是相对不导电的。一个过长的样品区域可能导致在毛细管内中断导电。可通过减短进样时间来降低这一影响。

    13. 通用瓶中液面太低,填充通用瓶到正确的高度,保证电极和毛细管能够浸到液面以下;一个时间很长的进样序列可能导致通用瓶中的液面太低,建议使用多组通用瓶进行冲洗。

    14. 电压泄露,用沾有水的脱脂棉按照常规流程清洗所有高压连接点,防止电压泄露;每次分析之前,检查缓冲液通用瓶瓶盖是否有电解质液滴,低温下操作可能导致冷凝问题。
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