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毛细管电泳无样品峰怎么办?

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2022/11/02
冲锋队

毛细管电泳（CE）

无样品峰出现，首先检查加电是否稳定，目前各大厂商的毛细管电泳仪主要看电流指标。

1. 如果没有电流

1.1可能是残留在毛细管内的溶液结晶，导致毛细管堵塞或毛细管断裂，用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出需拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂。如果断裂的话，需更换毛细管；若毛细管没有断裂的话，可以用水反向高压冲洗解决此问题。如果仍不能解决，建议更换毛细管。注意缓冲溶液使用时需用 0.45 μm 的过滤膜过滤，将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。

1.2背景缓冲液浓度太高：背景缓冲液浓度太高引起很大的电流，进而引起电解质沸腾或者释放气体，最终导致短路，需降低缓冲液浓度或者降低电压。

1.3样品溶剂浓度过高：纯有机溶剂或高离子强度的样品溶剂可能导致样品区域局部加热，导致该区域沸腾或释放气体，进而引起短路。减少进样时间或者用水稀释样品。

2. 电流波动很大，直至几乎消失，缓冲溶液中有气泡产生或者区带中有样品析出；需将缓冲溶液超声脱气，如果还有此现象发生，则可能是样品区带有析出，可以通过降低样品浓度/延长 Ramp time 来解决这一问题；对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品，则需要在缓冲溶液中加入添加剂来解决此类问题。

3. 电流初始值较小，后逐渐增大，可能是样品进样量过大，需减少进样量，通常进样参数设置在 0.5 psi， 5 sec 左右。

如果电流正常，需要从以下方面找原因。

4. 检查毛细管窗口，检查毛细管窗口，如果窗口位置有残留的灰烬，用沾有乙醇的纸巾轻轻擦拭干净。如果窗口位置不正，将窗口调整到正确位置。

5. 排查样品问题，微量样品瓶中可能困住一些小气泡，进样过程中导致气泡进入到毛细管内。用样品溶液重新装微量样品瓶，离心去除气泡；待测样品溶解度太低，如果在背景电解质中样品不溶，可能在毛细管内产生沉淀，选择其他可以充分溶解待测样品的背景电解质。样品浓度过低，使用高浓度样品测试。分离极性错误，对于蛋白样品，请注意蛋白在分离条件下其 PI 及所带电荷；对于核酸样品，通常条件下会带负电荷；样品在毛细管内壁吸附，对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端 pH 条件或动态涂层防止样品吸附。

6. 检测波长，检测波长设置不正确，请确认被分析物的特征吸收，检查方法中的检测波长设置。

7. 光学检测器或光纤损坏，进行标准样品的测试，如果没有正确的结果出现，则有可能存在硬件问题，请联系工程师。

8. 分析时间太短，延长分析时间或者增大电压，重新分析。

9. 氘灯燃尽，能量低，查看氘灯的使用时间，判断灯的运行状态是否正常。

10. 样品瓶装错样品或者位置放错。

11. 电压方向，电压方向加反，将会导致样品离子移动方向相反，检查方法和仪器设置。

12. 进样，进样失败，主要由没有气压引起，或者忘记加样品盖导致进样失败；检查气压是否正常，样品瓶盖是否干净或变形。进样时间太长，样品通常会溶解在水中或可能还有一些有机溶剂，因此是相对不导电的。一个过长的样品区域可能导致在毛细管内中断导电。可通过减短进样时间来降低这一影响。

13. 通用瓶中液面太低，填充通用瓶到正确的高度，保证电极和毛细管能够浸到液面以下；一个时间很长的进样序列可能导致通用瓶中的液面太低，建议使用多组通用瓶进行冲洗。

14. 电压泄露，用沾有水的脱脂棉按照常规流程清洗所有高压连接点，防止电压泄露；每次分析之前，检查缓冲液通用瓶瓶盖是否有电解质液滴，低温下操作可能导致冷凝问题。

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