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敲低 MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响
Ins_7c331746
2022/11/30
小矮马
私聊
生物制药
敲低
MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响
检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞生长增殖的影响
收集
H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组
细胞细胞
离心,并用完全培养基调整细胞浓度,H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、
H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 以每孔 1×104
个
细胞平铺于 96 孔板中,SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2,以每孔 1.3×
104
个
细胞平铺于 96 孔板中,37℃ 恒温培养箱中培养。铺板后,分别于 24 h、48 h、72 h、96 h、120h 在每孔加入 10
μL
CCK-8 溶液,37℃ 恒温培养箱中孵育 4h。并用酶标仪测定波长 450 nm 处 OD 值,利用
Graphpad
prism5 计算增殖情况。
检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响
收集
H69 、H82 、H526 、SW1271 的对照组和实验组细胞, 其中 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、
H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 细胞系以 1×104
个
细胞/孔的细胞密度接种于 96 孔板中,SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 以 1.3×104
个
细胞/孔的细
胞
密度接种于
96 孔板中。待细胞融合率约 80%,加入不同浓度顺
铂
。每组均设置对照组及空白组(仅有同体积培养基)。H69、H82、H526 的对照组和实验组
加药浓度梯度为 0、1、2、4、8、16、32、64 nmol/mL,SW1271 对照组和实验组细胞加药浓度梯度为 0、2、4、8、16、32、64、128、256 nmol/mL,(加药浓度梯度根据细胞类型、前期预实验结果及细胞对药物的敏感程度而定)。每种浓度设 6
个
复孔,每孔总体积为 100
μL
,培养 24、48、72、96、120 h 后
分别检测细胞活力。每孔加入
10
μL
的 CCK-8
(避光),培养箱中孵育
4 h 后取出,使用酶标仪测定波长为 450 nm 的吸光度(OD 值)。利用公式:抑制率=(加药组-空白组)/(对照组-空白组)计算增殖抑制率。实验重复 3 次,取平均值。以药物浓度为横坐标,细胞增殖抑制率为纵坐标,利用
Graphpad
prism5 绘图。
敲低
MSI1 对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响
CCK-8 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲
瓒
,生成的甲
瓒
物的数量与活细胞的数量呈正比,因此可以直接进行细胞增殖和毒性分析。
CCK-8 法 测 生 长 曲 线 实 验 结 果 如 图
3-1 显 示 , 实 验 组 H69-shMSI1-1 、
H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、
SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 OD
值明显
低于对照组。
表明敲低
MSI1
抑制了
SCLC 细胞的生长增殖。
图
MSI1 低表达对 H69、H82、H526、SW1271 对照组和实验组细胞增殖的抑制情况。应用
Graphpad
prism5 作图所示(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,表示与对照组相比,
敲低组
OD 值减小
具有统计学意义)。
测敲低
MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响
药敏实验结果如图
3-2 所示,与对照组相比,实验组 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、
SW1271-shMSI1-2 经不同浓度
顺铂处理
24、48、72、96、120 h 后细胞的药物敏感性无明显变化。
附件:
LD7 22.11.30 敲低 MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响.docx
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