关于液质联用基础问题

应助达人

1.液质联用，高分辨质谱以QE为例，一般进样浓度进样体积为多大--------------------------进样浓度以样品最高响应和仪器条件位限度，在不超过仪器响应限度和不污染仪器的前提下的浓度都可行，在满足检测目的需求和观测需要前提下保障化合物能响应稳定的浓度都行（两个分别是上限和下限的大致描述，可能说的不是特别清楚，自行理会哈）。
2?参照文献自己通过二级质谱图解谱时，需不需要扣除全部空白后，在一一对应解谱，还有为什么扣除空白后，总离子流图峰反而增多了，用xcalibur解谱的具体操作是什么（打开正/负模式下总离子流图，打开massrang输入具体分子量，最后一张图选择二级质谱图选TIC还是basepeak）------------------------------对于高分辨数据来说几乎不能直接拿xcalibur来解析，最好解析后可以使用xcalibur查看，massrang就行，xcalibur只是采集数据和MRM方法做定量分析好用
3.通过数据库匹配上的物质，还需要通过文献去确认吗？---------------------------------------需要，高分辨鉴定出来的化合物甚至还需要标品去匹配鉴别。且不说数据库匹配物质准确度怎么样，光是样品的复杂性和MS的特殊性对于高分辨数据的解析就已经够多够大挑战的了，当然最终要做到那一步还是要看自己 的需求

应助达人

一般UPLC进样体积不需要太大，不然容易产生溶剂效应

大佬，对于问题2我还是不明白，我的意思是我通过二级碎片与文献的碎片对比定性，basepeak,massrang,tic在二级碎片选择上有什么区别，然后我的图谱需不需要扣除空白得到全新的图在进行对比

应助达人

basepeak没用过，我也不知道是啥意思，不好意思哈，tic是针对MRM分析用的，massrang其实就差不多是按质量数检索同，高分辨ddms做的数据xcalibur好像是不能直接看ms2，需要layout后才能查看，但是这些操作并不会对ms2有什么影响.你的扣空白是指xcalibur的background subtract吗？对于高分辨数据来说这个功能不实用，在做方法的是时候引入exclusion和再接解析的标识清楚blank就行，有tracefinder或CD的话，你做高分辨的数据解析的时候用一下tracefinder和CD就知道了

好的，谢谢了

Orbitrap的合适分析浓度在 ppb-ppm级别，在保证灵敏度的前提下尽可能少进样可以获得更好的数据。tic是总离子流色谱图，是一段范围内的所有离子信号总和随时间变化的图，bpc是每个时刻最强信号的离子（基峰信号）随时间变化的色谱图，用于反馈样品主要成分，有一定的降噪效果，我平时喜欢用bpc，峰轮廓更清晰。但是有一种情况就是你要看某个化合物的二级质谱，filter选择了ms2通道后，只能选tic才能看到数据点。

扣除空白的问题，在xcal里有意义的是扣除某时间点的质谱图，通过在质谱图右键，扣除背景选项选择range1，然后再你想扣除的色谱时间段拖一段即可

质谱定性问题，这个是目前所有高分辨液质也没有固定答案的问题。业内普遍认为使用标准品确定质核比，rt，二级谱，同位素等信息最为可靠，然后依次是二级数据库匹配＞文献特征碎片匹配＞仅一级质谱+同位素匹配

谢谢大佬!