换个角度再聊聊掺假实验之动物水解蛋白检验过程的注意事项
概述
一说到蛋白质，大家总是想到三聚氰胺这个永远的痛点。那什么是动物水解蛋白呢？
水解蛋白是一种被处理过的蛋白质，其目的是为了增加膳食补充剂的吸收率以及促进肌肉生长而被广泛使用。然而，水解蛋白的摄入对身体会产生一定的不良影响。它可能引起肠胃不适，长时间过量的摄入水解蛋白会导致肝脏和肾脏的负担加重，产生肝肾疾病的风险。此外，水解蛋白含有谷氨酸和天冬氨酸等氨基酸，如果过度摄入，会使脑内谷氨酸的含量过高，产生神经性问题。
需要注意的是，水解蛋白虽然有一定的营养价值，但对于大部分人来说，摄入水解蛋白的必要性并不大，完全可以通过摄入其他蛋白质而满足身体所需。如果需要补充蛋白质，可以选择天然蛋白质来源，比如肉类、鱼类、豆类等食物。此外，如果您已经在使用水解蛋白补充剂，个人认为十分有必要。
用硝酸汞沉淀方法除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，并与饱和的苦味酸溶液会产生沉淀反应。这个方法我们再前期和大家讨论过了。今天在说说L-羟脯氨酸的方法.
1.测定原理
试样经酸水解后，过滤，用稀盐酸溶解，注入氨基酸分析仪进行测定。采用外标法定量。
2 试剂与材料
2.1除非另有规定，应选用优级纯试剂和符合GB/T 6682规定的一级水。
2.2 盐酸7.8mol/L，将650mL优级纯的浓盐酸小心倒入350mL超纯水中，混匀。
2.3 配制茚三酮显色液，方法如表1所示。
2.4 配制苯酚水溶液（5.0%，w/v）：称取苯酚5.0g，溶于100mL水中。
2.5 配制盐酸溶液（0.1 mol/L）：量取盐酸（7.8mol/L）16.6mL，倒入1000mL水中。
2.6 L-羟脯氨酸标准品，纯度≥99%。
2.7 配制L-羟脯氨酸标准储备液：称取100mg（精确到0.1mg）羟脯氨酸标准品，用盐酸溶液（0.1mol/L）溶解并定容至100mL容量瓶中。该溶液的浓度为1000mg/L，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。
2.8 准备苯酚溶液。
2.9 L-羟脯氨酸标准工作液：准确吸取L-羟脯氨酸标准储备液1.00mL于100mL的容量瓶内，用盐酸溶液（0.1mol/L）定容。该溶液的浓度为10.00mg/L，于4℃冰箱内贮存，有效期1周。
3 仪器与设备
L-8900氨基酸自动分析仪、电热恒温干燥箱、配有聚四氟乙烯密封盖的水解管、电子天平（精确到0.0001g）、定量滤纸、0.45μm水性样品过滤器（直径13mm）、氮吹仪。
4 分析步骤
4.1 样品处理
称取1～2g（精确至0.001g）牛奶样品于水解管中，加8.00mL盐酸，滴入3滴苯酚溶液，用一级水补足10.00mL，充氮后封管，置于110℃烘箱中保持22～24h，冷却后经滤纸过滤。取0.400mL滤液于氮吹仪上吹干，残留物用2.00mL盐酸溶液（0.1mol/L）溶解，过0.45μm滤器，备用。同时做空白对照。
4.2 样品测定
4.2.1 氨基酸分析仪条件
①分离柱：6 0 m m×4.6 m m（i.d）不锈钢柱，交换树脂为氨基酸分析专用树脂；②柱温：反应柱57℃、分离柱135℃；③泵流速：泵10.400mL/min、泵20.350mL/min；④进样体积：20μL；⑤检测波长：440nm；⑥茚三酮显色液：可按表1配制，也可根据仪器自身要求配制；⑦流动相缓冲液：可按照表2配制，也可根据仪器自身要求配制。
4.2.2 定量测定
按照外标法进行定量计算。
5 结果计算和表述
试样中L-羟脯氨酸的含量X，以质量分数mg/kg表示，单点校正按下式计算：
式中：
V1— 加入稀盐酸溶液定容的体积，mL；
V2— 水解液的定容体积，mL；
V3—水解样液的取样量，mL；
AS—L—羟脯氨酸标准溶液对应的色谱峰面积响应值；
A — 试样溶液对应的色谱峰面积响应值；
CS— L—羟脯氨酸标准溶液的浓度，Hg/mL；
m — 试样质量，g。
平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。
6 重复性
在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的2个平行测定的相对偏差不大于10%。
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