植物中17种游离氨基酸测定方法

植物中17种游离氨基酸测定方法

NaHCO₃，二硝基氟苯，KH₂PO₄，N,N-二甲基甲酰胺，乙酸钠均为分析纯，乙腈为色谱级，超纯水。Phenomenex Gemini NX C18（4.6 mm×250 mm, 5 μm），HPLC（LC-20AT）日本岛津。

2. 液相色谱条件。色谱柱：Phenomenex Gemini NX C18（4.6 mm×250 mm, 5 μm）；流动相：

A为0.05 mol/L乙酸钠（pH=6.4，含0.1% N,N-二甲基甲酰胺和10%乙腈），B为乙腈:水（体积比为1:1）；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：360 nm；进样量：10 μL，梯度洗脱程序见表1。

表1 液相梯度洗脱程序

称取2.0 g样品，精密称定，沸水提取1 h，过滤，滤液定容至50 mL，取上述滤液0.1 mL于10 mL容量瓶中，加入0.5 mL 0.5 mol/L NaHCO₃溶液，调pH到8.5，加入0.5 mL 1%二硝基氟苯衍生化试剂，混匀后60 ℃恒温水浴60 min，然后用0.1 mol/L KH₂PO4试液定容至10 mL，上机检测。
4. 实验结果：

采用柱前衍生法测定亚麻荠植株中的游离氨基酸，采用液相色谱法进行检测，由图1可知，各氨基酸对应的峰分离效果较好，共检测出13种氨基酸，氨基酸的组成及含量见表2。

图1 游离氨基酸液相色谱图

表2 亚麻荠植株中游离氨基酸组成及含量

注：*为必需氨基酸，“一”代表未检出