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LCMS分析方法开发过程中问题经验总结与分享

通标小菜鸟

2023/08/01
菜鸟分析队

液质联用（LCMS）

LCMS分析方法开发过程中问题经验总结与分享
通标小菜鸟

背景介绍：需要对一款药物中的主成分及显著杂质进行定性，包含UV图谱及MS图谱，其中主成分1个，杂质多个且含量均在0.1%~1.0%之间。

现有条件：Agilent LC一台；Agilent LCMS一台；色谱柱两根(一根C18+一根氰基柱)；单独杂质的LC分析方法若干，MS分析方法无。

大致思路:考虑到后续分析的便捷，因而想把已有分析方法进行整合，优化成一个方法。此时相当于新建立一个分析方法，因此需要先搞定液相条件，保证UV出峰没有问题，然后把相同条件移植到LCMS上，再优化质谱部分。

执行步骤：

1、收集相关已有分析方法及色谱资料，熟悉前人已做的工作；

2、准备主成分及相关杂质的标准样品，进行标样配制（可配制较高浓度标液，方面后续出峰识别）；

3、准备好仪器和色谱柱，准备流动相（一般为乙腈、甲醇和水）；

LC条件初次尝试:只采用一根C18色谱柱，梯度洗脱，一个半小时左右长程序，单标分别进一针，混标进一针，发现有个别杂质出峰不好，有些杂质不是单峰，而是多重峰，分离难度增加。

LC条件二次尝试:采用氰基柱，长程序测定，原先采用该柱子的杂质出峰比较好，但其余杂质出峰不佳，单独采用一根柱子测试的路子走不通。

LC条件三次尝试：将C18柱子与氰基住串联使用，测试效果不佳，目标峰容易受基质干扰，而且仪器初始压力接近450bar，离上限很接近，对仪器和柱子均会产生不良影响，遂放弃。

经过以上多次的尝试，发现要将这些方法都整合起来成为一个方法非属易事，起码在现有条件下是很难的，故放弃挣扎，转变思路，一个方法行不通那就分为两个，原先采用氰基柱测试的杂质依然延用原先条件，剩下的杂质合并成一个方法，采用C18色谱柱，这样可以参考一下以前的测定条件，不用大费周章去重新创建一个，只需要在原有基础上进行优化即可，这样拆分成两个方法后，UV图谱基本解决，随后移植到LCMS上进行进一步尝试。

将方法移植到LCMS后，编辑了MS参数，由于不知道化合物在哪个模式下出峰更好一点，便设置了正负离子模式同时扫描。随即走了几针标品，发现走出来的MS图跟基线差不多，紫外能够正常出峰。于是怀疑质谱部分未进到样，透过离子源那边的观察孔，用灯光照射发现看不到有形成喷雾流，也没有液滴形成，可以判断液相分流出来的一部分样品无法有效进入离子源。随后进行排查，找到一处管路堵点并进行反接疏通，疏通过后雾化器那边就有持续细密的喷雾喷出。

随后再次进样尝试，发现MS图谱上有出峰了，但是峰型很差且响应很低，无法满足要求，于是跟有经验的同事进行沟通，得出样品本身性质导致的离子化比较差，没有足够的带电化合物粒子进入检测器的结论。要想改善这种情况，需要往流动相中添加酸水来促进离子化。流动相中有一路纯水，便往纯水中添加了0.1%的甲酸，配成了甲酸水。

再次测试后峰型有所改善，响应也有所提高，但随之而来又出现新的问题，由于紫外采集波长在210nm左右，这个210nm又正好在甲酸的最大截止吸收波长范围内，又因为方法走的是梯度洗脱程序，因而只要甲酸水比例有所变化紫外图谱基线漂移值就会很大，波动就很厉害。于是在有机相中加入同等量的甲酸，这样不管梯度如何变化，进入到检测器中的甲酸就能趋于稳定，就能有效改善基线漂移的情况。

在上述这些问题都解决后，在对MS图进行分析的时候发现部分化合物的分子离子峰已经看不到了，只剩下一些碎裂的碎片峰，数值都比较小，从而判断出裂解电压值设定太高，故将裂解电压值进行降低，同时对离子源其余参数进行优化调整，比如离子源温度，气体流速，毛细管电压等等，最终获得了一个相对满足要求的分析方法。

总结：在日常分析方法开发的过程中，我们会遇到各种各样的问题。这就要求我们拥有一颗追求细致的心，能够找出问题所在并通过自己或者寻求外界帮助去解决问题。同时作为分析人员来说，我们往往希望自己能够一步到位，做到又快又好，但是现实往往并非如此，在遇到类似问题的时候我们在多次尝试未果后也不用死钻牛角尖，可以退一步与自己妥协，去寻找一个不那么完美的方案来解决问题。

分
该帖子已被版主-hujiangtao加10积分，加2经验;加分理由:鼓励原创

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通标小菜鸟

第1楼2023/08/03

应助达人

欢迎大家点赞评论

3

memory光阴

第2楼2023/08/05

应助达人

要是再附上点图片就更好了

4

Ins_baeeaeb7

第3楼2023/08/06

老师结合实例分享，比较有代表性

3

油条豆浆

第4楼2023/08/07

少了点示例图，有就更完善了

2

通标小菜鸟

第5楼2023/08/09

应助达人

涉及到一些保密问题，所以图就不放了哈，望理解
memory光阴(Ins_91d3b22d) 发表:要是再附上点图片就更好了

0

通标小菜鸟

第6楼2023/08/09

应助达人

感谢老师作出点评
Ins_baeeaeb7(Ins_baeeaeb7) 发表:老师结合实例分享，比较有代表性

0

通标小菜鸟

第7楼2023/08/09

应助达人

保密问题，望理解
油条豆浆(Ins_f753c282) 发表:少了点示例图，有就更完善了

0

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