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第1楼2024/10/24
在顶读模式下选择荧光酶标板,需要考虑以下几个方面:
颜色:
黑色:黑色酶标板自身会吸收光,可有效减少背景光的干扰,适合检测较强的荧光信号,能提高检测的信噪比和准确性,所以如果您的荧光信号较强,优先选择黑色酶标板。
白色:白色酶标板可用于较弱的荧光检测,常用于一般的化学发光检测,但在荧光检测中也有应用,其信号强度通常会高于黑色酶标板。如果荧光信号相对较弱,白色酶标板可能更适合,它可以增强信号的反射和收集,提高检测的灵敏度。
透明:一般不建议在顶读模式的荧光检测中使用透明酶标板,因为透明板无法有效阻挡周围光线的干扰,会导致较高的背景噪声,影响检测结果的准确性,但如果对检测要求不高或只是进行初步的实验探索,也可以尝试使用。
底部形状:
平底:平底酶标板的折射率低,适用于在酶标仪上进行检测,并且平底的设计使得孔内的液体分布相对均匀,对于需要精确测量荧光强度的实验较为合适。如果您的实验对液体的均匀性和测量的准确性要求较高,平底酶标板是一个不错的选择。
U 型底:U 型底的酶标板折射率较高,方便加样、吸样和混匀等操作,但在顶读模式下,其光学性能可能不如平底酶标板,可能会导致荧光信号的散射或不均匀分布,影响检测结果。不过,如果您的实验对加样和混匀操作要求较高,且对荧光检测的精度要求不是特别严格,U 型底的酶标板也可以考虑。
V 型底:V 型底的酶标板主要用于精确吸取样品,在顶读模式下的荧光检测中应用较少,因为其底部的形状可能会影响荧光信号的收集和检测。但如果您的实验需要精确控制样品的体积和吸取量,并且对荧光检测的要求不是特别高,V 型底的酶标板也可以作为一种选择。
结合力:
高结合力:表面经处理后蛋白结合能力大大增强,可达 300 - 400 ng IgG/cm?,主要结合的蛋白分子量>10 kD。如果您的实验中待测物质的浓度较低,需要酶标板具有较高的蛋白结合力来保证足够的信号强度,那么高结合力的酶标板是比较好的选择。不过,高结合力的酶标板也容易产生非特异性反应,需要进行充分的封闭处理。
中结合力:经表面疏水键被动与蛋白结合,适合作为分子量>20 kD 的大分子蛋白的固相载体,蛋白结合能力为 200 - 300 ng IgG/cm?。中结合力的酶标板相对来说非特异性反应较少,适用于一些对特异性要求较高的实验。如果您的待测物质是大分子蛋白,并且希望减少非特异性结合的干扰,中结合力的酶标板可能更适合。
氨基化:表面经过改性处理后带有正电荷的氨基,适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和 pH 值,其表面可通过离子键与带负电荷的小分子结合。如果您的实验中待测物质是小分子蛋白,氨基化的酶标板可以提供较好的结合效果,但同样需要注意封闭处理,以减少非特异性结合。
材质:
聚苯乙烯(PS):是 ELISA 中应用最广的材质,具有良好的光学性能和化学稳定性,表面易于进行修饰和处理,适合各种荧光检测实验。如果您对酶标板的材质没有特殊要求,聚苯乙烯材质的酶标板是一个比较通用的选择。
聚氯乙烯(PVC):质软板薄,可剪割,价格低廉,但光洁度不如聚苯乙烯板,孔底也不如聚苯乙烯平整,可能会导致背景值增加。不过,如果您的实验预算有限,或者对酶标板的要求不是特别高,聚氯乙烯材质的酶标板也可以考虑。