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生物实验中的基础操作—溶液配制及细胞培养

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2023/10/08
小矮马

生物实验中的基础操作—溶液配制及细胞培养

溶液配制

1. 完全培养基：过滤55 mL Gibco胎牛血清，56 °C, 30 min灭活，加入到500 mL1640培养基中，加入5 mL抗青霉素链霉素，7.5 mLHEPES 溶液，用于DLBCL Pfeiffer细胞的培养，充分混匀放置4°C保存。

2. 10% APS：称取0.1 g过硫酸铵溶于1 mLddH₂O中，放置4 °C保存。

3. 5×Tris-Glycine Buffer 电泳缓冲液：称取15.1 g Tris，94 g甘氨酸，5 g SDS，用ddH₂O定容至1 L，充分搅拌溶解，室温保存。

4. 转膜缓冲液：称取Tris15.14 g，甘氨酸72.16 g，用ddH₂O定容至1 L，充分搅拌溶解，室温保存。然后每次使用时取200 mL 转膜液和甲醇200 mL，用ddH₂O定容至1 L充分混匀。

5. 10% SDS：称取10 gSDS，ddH₂O定容至100 mL，68℃加热溶解，调整pH至7.2，室温保存。

6. 5% 脱脂牛奶封闭缓冲液：称取1 g脱脂奶粉溶于20 mL TBST Buffer充分溶解，4 °C保存。

7. TBST Buffer：8.8 g NaCl和1M Tris-HCl (pH 8.8) 20 mL，溶解于1000 mL ddH2O

细胞培养及传代

1. 细胞复苏：从液氮中取出细胞后，将细胞冻存管用细胞复苏盒迅速转移至37 °C恒温水浴锅中，轻摇使细胞迅速解冻。细胞解冻后立即吸取至10 mL的完全培养基中，吹打混匀，900 rpm离心8 min。吸弃上清，用5 mL完全培养基重悬细胞，将细胞接种至25 cm² 培养瓶中，恒温37 °C，5% CO₂ 条件下培养。

2. 细胞传代：贴壁细胞吸弃培养基后用5 mL 1×PBS 清洗2次，吸弃上清，每25 cm²培养瓶或6 cm培养皿加入1 mL胰酶消化2 min。镜下观察细胞开始脱落，加入2 mL完全培养基终止消化，移入15 mL离心管内，900 rpm，离心8 min。悬浮细胞直接移入15 mL离心管内，900 rpm，离心8 min。吸弃上清液，加入新鲜培养基重悬细胞并吹打混匀。将细胞按实验需求接种于培养瓶或培养皿中，培养条件同上。

附件：

2-2 生物实验中的基础操作—溶液配制及细胞培养 .docx
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